应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！
101/1返回列表
查看: 823  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 nandaxq 的 8 个金币

nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！

本人，因要做荧光定量PCR，对引物的特异性要求很高，二聚体都没有最好，

现在所P条带，除目的带外，还具有比较明显的二聚体（导致Real-Time时出现

2个峰），请教各位大侠，如何在现有引物条件下，减少甚至去除二聚体？

谢谢指教！
回复此楼

» 猜你喜欢
引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
1楼 2008-11-25 23:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lipishun

金虫 (小有名气)
你设计的引物很特异？
提高退火温度，或者直接用两步法
赞一下 回复此楼
2楼2008-11-26 00:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nandaxq

铜虫 (小有名气)
是的，只有一条带，但二聚体明显，温度已由55提到了57，还是没有什么改善，

请问两步法是何意？能否讲详细点，谢谢。
赞一下 回复此楼
引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
3楼2008-11-26 11:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
nandaxq(金币+1,VIP+0):这个估计很难啊，57要跳到72行不通的吧。
就是退火和延伸用同个温度，就是说，退火温度要很高
试试热启动酶，能够很大程度上消除dimer的
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2008-11-26 16:35:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuotuozw

银虫 (小有名气)
加最少的引物就可以了
赞一下 回复此楼
5楼2008-11-27 08:41:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taishuai2004

其实 这些办法的作用都很小 主要还是在引物设计上  多设计几对引物试一试
赞一下 回复此楼
6楼2008-11-27 08:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nandaxq

铜虫 (小有名气)
我都设了好多引物啦，上游5条，下游5条呢，。结果还是没有满意的啊
赞一下 回复此楼
引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
7楼2008-11-27 21:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shining-rose

金虫 (小有名气)
★
nandaxq(金币+1,VIP+0):谢谢
不要着急。
1.选用好一些的酶。
2.多设计几对引物，相互比较（不要用同一软件设计）
3.提高退火温度（建议做一个退火温度的梯度，记得做对照哦）
4.实在不行，还是可以做荧光pcr的，影响应该不大，你的目的片段多大？
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2008-11-28 14:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nandaxq

铜虫 (小有名气)
谢谢各位，fighting
赞一下 回复此楼
引诱若够，女人无所谓正派；筹码若高，男人无所谓忠诚；骑着白马的唐僧；带着翅膀的鸟人。
9楼2008-11-28 17:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiny1979

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢提供帮助~~
还有一个办法也许可以试试，加入上下游引物的量不按1：1加入，可按1/2或1/3的比例，当然前提在引物已不能重新选择设计。这是一家专门做荧光定量PCR公司的技术支持人员提供的经验。
我个人的体会是可把引物浓度降低，这样二聚体也会少。
赞一下(10人) 回复此楼
10楼2008-11-28 17:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nandaxq 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 286求调剂 +13 Faune 2026-03-21 13/650 2026-03-26 19:52 by peike
[考研] 081700 调剂 267分 +11 迷人的哈哈 2026-03-23 11/550 2026-03-26 15:41 by zzll406
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 10/500 2026-03-26 13:11 by 公瑾逍遥
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭