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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助，有效去除引物二聚体的方法。谢谢！

本人，因要做荧光定量PCR，对引物的特异性要求很高，二聚体都没有最好，

现在所P条带，除目的带外，还具有比较明显的二聚体（导致Real-Time时出现

2个峰），请教各位大侠，如何在现有引物条件下，减少甚至去除二聚体？

谢谢指教！
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1楼 2008-11-25 23:22:15
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lipishun

金虫 (小有名气)
你设计的引物很特异？
提高退火温度，或者直接用两步法
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2楼2008-11-26 00:06:41
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
是的，只有一条带，但二聚体明显，温度已由55提到了57，还是没有什么改善，

请问两步法是何意？能否讲详细点，谢谢。
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3楼2008-11-26 11:24:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
nandaxq(金币+1,VIP+0):这个估计很难啊，57要跳到72行不通的吧。
就是退火和延伸用同个温度，就是说，退火温度要很高
试试热启动酶，能够很大程度上消除dimer的
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4楼2008-11-26 16:35:14
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tuotuozw

银虫 (小有名气)
加最少的引物就可以了
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5楼2008-11-27 08:41:47
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taishuai2004

其实 这些办法的作用都很小 主要还是在引物设计上  多设计几对引物试一试
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6楼2008-11-27 08:51:43
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
我都设了好多引物啦，上游5条，下游5条呢，。结果还是没有满意的啊
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7楼2008-11-27 21:35:29
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shining-rose

金虫 (小有名气)
★
nandaxq(金币+1,VIP+0):谢谢
不要着急。
1.选用好一些的酶。
2.多设计几对引物，相互比较（不要用同一软件设计）
3.提高退火温度（建议做一个退火温度的梯度，记得做对照哦）
4.实在不行，还是可以做荧光pcr的，影响应该不大，你的目的片段多大？
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8楼2008-11-28 14:48:26
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nandaxq

铜虫 (小有名气)
谢谢各位，fighting
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9楼2008-11-28 17:00:32
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tiny1979

金虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢提供帮助~~
还有一个办法也许可以试试，加入上下游引物的量不按1：1加入，可按1/2或1/3的比例，当然前提在引物已不能重新选择设计。这是一家专门做荧光定量PCR公司的技术支持人员提供的经验。
我个人的体会是可把引物浓度降低，这样二聚体也会少。
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10楼2008-11-28 17:13:14
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