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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助,有效去除引物二聚体的方法。谢谢!

本人,因要做荧光定量PCR,对引物的特异性要求很高,二聚体都没有最好,

现在所P条带,除目的带外,还具有比较明显的二聚体(导致Real-Time时出现

2个峰),请教各位大侠,如何在现有引物条件下,减少甚至去除二聚体?

谢谢指教!
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引诱若够,女人无所谓正派;筹码若高,男人无所谓忠诚;骑着白马的唐僧;带着翅膀的鸟人。
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nandaxq

铜虫 (小有名气)

是的,只有一条带,但二聚体明显,温度已由55提到了57,还是没有什么改善,

请问两步法是何意?能否讲详细点,谢谢。
引诱若够,女人无所谓正派;筹码若高,男人无所谓忠诚;骑着白马的唐僧;带着翅膀的鸟人。
3楼2008-11-26 11:24:47
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lipishun

金虫 (小有名气)

你设计的引物很特异?
提高退火温度,或者直接用两步法
2楼2008-11-26 00:06:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


nandaxq(金币+1,VIP+0):这个估计很难啊,57要跳到72行不通的吧。
就是退火和延伸用同个温度,就是说,退火温度要很高
试试热启动酶,能够很大程度上消除dimer的
4楼2008-11-26 16:35:14
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tuotuozw

银虫 (小有名气)

加最少的引物就可以了
5楼2008-11-27 08:41:47
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