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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒去磷酸化,乙醇沉淀问题 已有1人参与

今天做了质粒PET30a的去磷酸化,乙醇沉淀,电泳时什么都没有。之前提的质粒图一,包括回收图二质量都不错,不知为什么酶切后乙醇沉淀就什么都没有了。
是不是乙醇沉淀时把质粒倒掉了?那怎么回收沉淀?除了这个原因还有可能是其他问题吗。
求大神!

质粒去磷酸化,乙醇沉淀问题


质粒去磷酸化,乙醇沉淀问题-1


@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

有人帮忙解答吗,木虫的大神很多,我怎么遇不到

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2楼2016-10-04 17:27:57
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stonegold

至尊木虫 (知名作家)

铁杆木虫

帮忙顶一下!
3楼2016-10-04 19:04:40
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

4楼2016-10-04 20:19:52
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
3mol乙酸钠+无水乙醇

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5楼2016-10-04 20:42:01
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zeyuanzi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 梦想天行 at 2016-10-04 20:42:01
3mol乙酸钠+无水乙醇

这些步骤我都有照来

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6楼2016-10-05 08:56:52
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by zeyuanzi at 2016-10-05 08:56:52
这些步骤我都有照来
...

换试剂盒或者加入商品化核酸沉淀剂!

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7楼2016-10-05 08:58:21
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弑者星魂

金虫 (正式写手)

酶切之后为什么要乙醇沉淀。我假设你的目的是酶切之后载体去磷酸化

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8楼2016-10-05 21:58:16
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)

酶切之后可以直接点个胶看一下。磷酸后也可以直接点胶看。我觉得很可能是酶切后磷酸化时间太长了。

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9楼2016-10-05 22:59:19
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草溪河

铁虫 (著名写手)

考虑回收效率吧。是先平末端酶切质粒,电泳回收,再去磷酸化乙醇沉淀吗?

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10楼2016-10-06 07:44:19
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