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guozhonglong

银虫 (正式写手)

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专业: 天然药物化学

[求助] HPLC方法开发已有4人参与

各位：
   我在做HPLC方法开发时，在4.9min处出现一个小峰，试了很多方法都除不掉，请各位多多指教！
   流动相：A是40mM的KH2PO4
                  B是乙腈
      溶剂：梯度的起始比例A：B=96：4.
   可以确定4.9min杂峰是溶剂引入的，因此溶剂尝试了不同比例的A和B，NH4H2PO4及NaH2PO4均除不掉。
请各位大师不吝赐教！

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1楼 2016-09-28 17:11:45

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guozhonglong

银虫 (正式写手)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 星海慧儿 at 2016-09-29 09:19:26
不管怎么调整，这个小峰的面积一直没变过？你怎么判定就是溶剂引起的呢？不论它是溶剂峰还是溶剂里面的杂质峰，随着溶剂比例德邦变化，它的大小总会有变化的啊，你多给些信息，越详细越好，这样才能帮你判断，不然很 ...

1.你好，在不吸取溶剂，空走一针，基线很平，而走空白溶剂就有那个小峰，所以说是溶剂里面引入的；
2.在流动相为KH2PO4，当进10ul时，小峰的面积基本保持在0.0250mAU，当进20ul时，小峰的面积在0.060mAU。流动相为NaH2PO4,面积为基本是0.0350。流动相为 NH4H2PO4,面积为基本是0.040。
3.在流动相为KH2PO4时，溶剂：A:B=98：2,小峰面积0.0414，A:B=96：4,面积为0.0258，A:B=94:6，面积为0.0335.
4.超纯水和屈臣氏水都试过了，除不去。
请大师多多指教！