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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 泼尼松龙的色谱条件
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东方_竹嫣

铁虫 (初入文坛)

[求助] 泼尼松龙的色谱条件 已有2人参与

最近在做关于泼尼松龙的实验，遇到了一个棘手的问题，就是在进液相的时候，保留时间有点变化，不稳定。
色谱条件：60%甲醇+40%0.02M乙酸铵，温度30，流速1ml/min，保留时间在8.2左右。
之后考虑到保留时间对峰面积的影响，我就重新调节了流动相，采用60%甲醇+40%水、70%甲醇+30%0.02M乙酸铵、60%甲醇+40%水（含）。。。,但是结果都是不理想，要么就是基线不平，或者峰分不开，搞得我内心焦虑。求指导啊！
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1楼 2016-09-26 15:54:42
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
含量测定还是有关物质，检测波长是多少，乙酸铵做缓冲液检测波长不能太低，乙酸铵截止波长在230 nm附近，波长太低噪音很大且容易基线波动！
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2楼2016-09-26 19:02:06
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 东方_竹嫣 at 2016-09-28 14:59:10
是含量测定，检测波长240nm....

含量测定可以看看有没有更优的波长可选择！240nm波长问题也不大。可以将困扰的图上传大家看一看！
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4楼2016-09-28 16:29:37
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klicking

至尊木虫 (著名写手)
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5楼: Originally posted by 东方_竹嫣 at 2016-09-28 21:42:29
泼尼松龙在UV/Cl2中的降解情况     60%甲醇+0.02M乙酸铵   流速1min  柱压19.7Mpa 30度
这个图还算好看点，但是保留时间变化明显，我在这里都只是考虑了泼尼松龙的保留时间，找了几个原因，如下：
1、因为实验室 ...

其实你逻辑很清晰，只是自己设了很多槛！你的产物和目标峰保留时间分别是多少？混合流动相超声产热是正常的，你可通过密闭性好的瓶子混合超声，保证少溢出或者平行操作也行，不影响你的最终检测的！另外，你室温多少？
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6楼2016-09-28 22:07:23
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BTS防弹

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般都是根据药典操作，如果不行再更改方法的。乙腈做液相的流动相很正常，保证通风也没有很可怕
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7楼2016-09-29 09:34:56
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柳絮虫

新虫 (职业作家)
药典方法比较经典，而且可靠性大。应该首选，何必自己另找方法？自己的方法，难道还要去搞方法学验证？
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8楼2016-09-30 16:32:55
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东方_竹嫣

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2016-09-26 19:02:06
含量测定还是有关物质，检测波长是多少，乙酸铵做缓冲液检测波长不能太低，乙酸铵截止波长在230 nm附近，波长太低噪音很大且容易基线波动！

是含量测定，检测波长240nm.
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3楼2016-09-28 14:59:10
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东方_竹嫣

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2016-09-28 16:29:37
含量测定可以看看有没有更优的波长可选择！240nm波长问题也不大。可以将困扰的图上传大家看一看！...

泼尼松龙在UV/Cl2中的降解情况     60%甲醇+0.02M乙酸铵   流速1min  柱压19.7Mpa 30度
这个图还算好看点，但是保留时间变化明显，我在这里都只是考虑了泼尼松龙的保留时间，找了几个原因，如下：
1、因为实验室条件限制，不能梯度洗脱，液相脱气装置已坏；
2、必须事先将甲醇和乙酸铵混合，在混合超声过程中，发现两者混合的时候会发热，对此，我在超声装置中加入了大量冰块，以减少甲醇的挥发和乙酸铵的分解。
3、柱子不行，为此，买了新柱子，表示还是不行。
4、柱温和流动相流速，均进行了调节，但结果不佳。
5、因为自己做水中有机污染物降解的，所以采用的是水溶解的方法对目标物进行溶解，药典里面的是甲醇溶解的，我之前也考虑的这个原因，限于自己的研究，所以最后还是采用了水溶解，并且尽可能的配制低浓度的。
之前查阅过的文献人家采用了甲醇和乙酸的方法，但是是梯度洗脱，实验室条件限制，所以只能另寻他法。有采用乙腈的，考虑到其毒性，直接PASS掉了，所以才会想着用甲醇和乙酸铵来调。我现在要达到的目标是：1）目标物保留时间不变，2）产物和目标物的峰能够分开，3）跑完一针的时间不超过10min，因为自己的进样的数量比较多，4）保证柱压低于20 MPa.
我打算明天再原模原样的按药典做一次，如果还是不行的话，考虑用乙腈。辛苦大神了。
泼尼松龙的色谱条件
60%甲醇+0.02M乙酸铵
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5楼2016-09-28 21:42:29
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东方_竹嫣

铁虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by klicking at 2016-09-28 22:07:23
其实你逻辑很清晰，只是自己设了很多槛！你的产物和目标峰保留时间分别是多少？混合流动相超声产热是正常的，你可通过密闭性好的瓶子混合超声，保证少溢出或者平行操作也行，不影响你的最终检测的！另外，你室温多 ...

室温是25摄氏度，我前几天按照药典的做了，目前还是没有把降解产物和目标物分开。
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9楼2016-10-08 15:59:32
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东方_竹嫣

铁虫 (初入文坛)
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9楼: Originally posted by 东方_竹嫣 at 2016-10-08 15:59:32
室温是25摄氏度，我前几天按照药典的做了，目前还是没有把降解产物和目标物分开。...

这是0.5ml/min, 40度，65%甲醇+35%水的数据，图中那个目标物的峰和旁边的小峰没有分开。我师兄建议我做一个50%比例的，我尝试了一下，发现我的产物峰不见了，目标物的峰也比之前的要矮很多，我觉得我应该做65%甲醇+35%水的数据，这个比例比较合适，之前一直用的怡宝的水做水相，现在用超纯水会不会好些？
泼尼松龙的色谱条件-1
65%甲醇+35%水的数据


泼尼松龙的色谱条件-2
50%甲醇+50%水的数据
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10楼2016-10-08 16:40:00
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