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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 明胶酶谱检测法
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nvwangzzh

金虫 (正式写手)

女王

[求助] 明胶酶谱检测法 已有1人参与

麻烦问一下，有谁做过明胶酶谱检测，由于要做明胶酶谱检测，我一点也没有接触过，求指点如何确定抓的条带是MMP9还是MMP2
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1楼 2016-09-24 14:40:50
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 应助指数-1, 鼓励回帖交流 2016-09-26 22:51:54
是跑native page，然后跟底物反应那种吗？我没有做过这个酶，但是我做过其他酶的酶谱实验。基本思路都差不多。都是根据酶的分子量来判断的。
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nvwangzzh
2楼2016-09-24 23:31:12
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nvwangzzh

金虫 (正式写手)

女王
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-09-24 23:31:12
是跑native page，然后跟底物反应那种吗？我没有做过这个酶，但是我做过其他酶的酶谱实验。基本思路都差不多。都是根据酶的分子量来判断的。

谢谢，还有疑问，没有mark么？没有什么对照么？最近导师让我查这个方法，做预实验，有许多地方不懂请谅解。添麻烦了（我经常做蛋白免疫印迹，通过蛋白质分子质量与mark对照就能来确定蛋白质的大体位置，从而判断所出的条带是否是我想要的）
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3楼2016-09-25 18:40:00
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nvwangzzh at 2016-09-25 18:40:00
谢谢，还有疑问，没有mark么？没有什么对照么？最近导师让我查这个方法，做预实验，有许多地方不懂请谅解。添麻烦了（我经常做蛋白免疫印迹，通过蛋白质分子质量与mark对照就能来确定蛋白质的大体位置，从而判断所 ...

native page，用Marker，参考意义不是很大。因为蛋白是靠自身的电荷移动，另外也有许多多聚体。你可以做阳性对照。就是纯化好的某个酶，单独上一个泳道，这样比较简单，当然，如果你实验室条件允许，也可以把相应的条带切下来，打质谱，也很有说服力。
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4楼2016-09-25 20:50:47
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nvwangzzh at 2016-09-25 18:40:00
谢谢，还有疑问，没有mark么？没有什么对照么？最近导师让我查这个方法，做预实验，有许多地方不懂请谅解。添麻烦了（我经常做蛋白免疫印迹，通过蛋白质分子质量与mark对照就能来确定蛋白质的大体位置，从而判断所 ...

native page，我还没有做过WB，不知道结果是什么样子的。
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5楼2016-09-25 20:55:10
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nvwangzzh

金虫 (正式写手)

女王
引用回帖:
4楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-09-25 20:50:47
native page，用Marker，参考意义不是很大。因为蛋白是靠自身的电荷移动，另外也有许多多聚体。你可以做阳性对照。就是纯化好的某个酶，单独上一个泳道，这样比较简单，当然，如果你实验室条件允许，也可以把相应的 ...

一定只有一个条带么？你怎么确定出的条带一定是MMP9呢？你单独上一个泳道为纯蛋白么？
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6楼2016-09-26 20:05:38
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nvwangzzh: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 细心，有帮助 2016-09-29 09:35:34
引用回帖:
6楼: Originally posted by nvwangzzh at 2016-09-26 20:05:38
一定只有一个条带么？你怎么确定出的条带一定是MMP9呢？你单独上一个泳道为纯蛋白么？...

是的，就是用标准品，此为阳性组。一般实验室都不一定有标准品。你理解的阳性对照，是什么呢？
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7楼2016-09-26 20:25:25
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by nvwangzzh at 2016-09-26 20:05:38
一定只有一个条带么？你怎么确定出的条带一定是MMP9呢？你单独上一个泳道为纯蛋白么？...

native page，条带不一定只有一个。就我的经验，条带是比较模糊的那种。但是在酶谱实验中，一般都是native page，因为sds会使大部分蛋白不可逆变性。也有特例，我做过的一个酶，去除sds，会部分有活性，在做酶谱时，我用的sds-page，条带比较清晰，可以根marker比对，说服力也比较强。但这毕竟是特殊情况，你也可以试下。
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8楼2016-09-26 20:31:27
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