应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真核表达
121/2返回列表12下一页
查看: 1592  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苓宁988

新虫 (小有名气)

[求助] 真核表达 已有1人参与

克隆病毒的某个非结构蛋白后做真核表达，一直不顺利！这是我最近连接pCAGGS后的一个重组质粒，酶切和测序都正确，转染293T细胞后做的IFA，标签是Flag，但是不明白为什么我的蛋白表达看着不是在细胞质，而且感觉这么不太正常呢？明年要毕业了，实验还是不顺利，急死了，希望大神指导，谢谢！

真核表达
4ug-4.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-09-20 11:40:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ttszero

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-21 22:49:01
光定位还有其他么？你用标签抗体免疫荧光？我一般目的蛋白抗体做，不知道有没有差异，就算你裂解细胞做wb，flag一抗还是拉下很多杂带，感觉不太可信

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2016-09-21 22:45:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以提供该技术服务

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-09-20 14:23:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苓宁988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by star013 at 2016-09-20 14:23:26
我们公司可以提供该技术服务

请问是什么公司？
赞一下 回复此楼
3楼2016-09-20 14:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)
北京艾普希隆生物科技有限公司

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-09-20 14:54:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苓宁988

新虫 (小有名气)
自己顶一下！
回复此楼
5楼2016-09-21 08:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ConnConn

新虫 (著名写手)
除了定位你还有别的数据吗，比如互作蛋白或者共定位？有些病毒蛋白定位亚细胞结构的！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-09-21 22:29:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苓宁988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ttszero at 2016-09-21 22:45:50
光定位还有其他么？你用标签抗体免疫荧光？我一般目的蛋白抗体做，不知道有没有差异，就算你裂解细胞做wb，flag一抗还是拉下很多杂带，感觉不太可信

帖子中的图片是用标签Flag的抗体做的荧光。做WB时，用Flag做一抗，确实显色时有很多杂带。还有一个问题是，别人转染后观察细胞都能看到质粒和脂质体的混合物（小点样的东西），但我的转染后却观察不到，这种情况是不是也会影响转染效率，是什么原因呢？ PS：质粒提取用的是OMEGA去内毒素的试剂盒。
赞一下 回复此楼
8楼2016-09-22 10:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苓宁988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ConnConn at 2016-09-21 22:29:55
除了定位你还有别的数据吗，比如互作蛋白或者共定位？有些病毒蛋白定位亚细胞结构的！

我现在想先确定这个蛋白能否表达成功，然后再进行蛋白互作实验呢，所以别的数据基本没有。有个情况就是，我的这个基因连接到pCAGGSS上加大转染剂量能观察到上图结果，但是换个基因（相同病毒的另外的非结构蛋白基因）转染，IFA结果还不如上图，甚至就直接没有。期间也换过pEGFP-C1载体（重组质粒测序、酶切都对），但是结果还是不行，不知道怎么回事？
    还有一个问题是，别人转染后观察细胞都能看到质粒和脂质体的混合物（小点样的东西），但我的转染后却观察不到，这种情况是不是会直接影响了转染，导致质粒基本就没有进入细胞啊？
赞一下 回复此楼
9楼2016-09-22 10:10:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2016-09-22 22:24:01
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2016-09-22 22:08:13
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 苓宁988 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 5/250 2026-02-08 08:32 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:26 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:12 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:46 by vs90ilomwc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:32 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:27 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[硕博家园] 博士延得我，科研能力直往上蹿 +8 偏振片 2026-02-02 8/400 2026-02-08 06:52 by liyeqik
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[基金申请] 面上项目申报 +3 Tide man 2026-02-01 3/150 2026-02-05 22:56 by god_tian
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭