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苓宁988

新虫 (小有名气)

[求助] 真核表达 已有1人参与

克隆病毒的某个非结构蛋白后做真核表达,一直不顺利!这是我最近连接pCAGGS后的一个重组质粒,酶切和测序都正确,转染293T细胞后做的IFA,标签是Flag,但是不明白为什么我的蛋白表达看着不是在细胞质,而且感觉这么不太正常呢?明年要毕业了,实验还是不顺利,急死了,希望大神指导,谢谢!

真核表达
4ug-4.jpg
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苓宁988

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by ttszero at 2016-09-21 22:45:50
光定位还有其他么?你用标签抗体免疫荧光?我一般目的蛋白抗体做,不知道有没有差异,就算你裂解细胞做wb,flag一抗还是拉下很多杂带,感觉不太可信

帖子中的图片是用标签Flag的抗体做的荧光。做WB时,用Flag做一抗,确实显色时有很多杂带。还有一个问题是,别人转染后观察细胞都能看到质粒和脂质体的混合物(小点样的东西),但我的转染后却观察不到,这种情况是不是也会影响转染效率,是什么原因呢? PS:质粒提取用的是OMEGA去内毒素的试剂盒。
8楼2016-09-22 10:02:47
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star013

新虫 (知名作家)


我们公司可以提供该技术服务

发自小木虫Android客户端
2楼2016-09-20 14:23:26
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苓宁988

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by star013 at 2016-09-20 14:23:26
我们公司可以提供该技术服务

请问是什么公司?
3楼2016-09-20 14:40:43
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star013

新虫 (知名作家)


北京艾普希隆生物科技有限公司

发自小木虫Android客户端
4楼2016-09-20 14:54:23
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