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猪皮胶原的分型
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各位大侠,我是从猪皮中提取胶原,因为要得到I型胶原,我按照文献中的方法,用0.1M的NaOH和10%的正丁醇去除杂蛋白和脂肪后,加入胃蛋白酶酶溶,提取出来的胶原经离心、盐析、透析和冷冻干燥后,得到白色海绵状的胶原海绵;接下去我按照资料中的方法,将海绵溶解到0.05M中的醋酸中,加入1.6M的NaCl后,有蛋白析出(1),放置一天,离心,取上清液,再加入NaCl的时候就没有蛋白析出了。 也就是我分型不成功,失败了。 各位大侠能帮我看看我哪里出现问题了吗?按照文献中的方法,NaCl为1.6M时,析出的应该为Ⅲ型胶原,为2M时,析出的为Ⅳ型胶原;2.6M时,析出的为I型胶原, 可是我第二步的时候就没有胶原析出了。 在做实验的过程中,我感觉第一步离心的时候,上清液就很清,没有胶原溶液那种粘稠的感觉了,沉淀的量也跟我加入的量差不多了,感觉胶原在第一步全部析出了。 我只有这么多金币了,麻烦各位大侠帮忙了,谢谢 |
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