应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆，连接转化能长菌落，但是菌液PCR鉴定没有结果
412/5返回列表上一页12345下一页
查看: 4558  |  回复: 40
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:43:49
xn8008: 应助指数+1 2016-10-14 09:43:59
引用回帖:
10楼: Originally posted by lyzjc at 2016-10-01 08:13:36
“换个批次”的意思是重新买同样的么？还是换一种载体？...

重新买，你想换一种载体的话也可以

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
···
11楼2016-10-01 08:39:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ttszero

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:43:55
xn8008: 应助指数+1 2016-10-14 09:44:04
产物多大？如果太大或者本身多ta重复，建议用同源重组方法连接

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2016-10-02 18:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:44:10
建议做下质粒DNA提取，如果加入的片段足够长，电泳时阳性克隆和对照质粒区别会很明显，再做下酶切，一目了然。虽然是笨办法，但是很奏效。
赞一下 回复此楼
13楼2016-10-02 19:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wywahh

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:44:20
菌液pcr也可能出现扩不出来的情况，可以送一批去测序，做转化的时候做对照了吗，确定感受态没有问题吗？这些都没有问题，还可以摇菌提取质粒来重新扩增检测。
赞一下 回复此楼
14楼2016-10-13 08:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyzjc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:44:32
xn8008: 应助指数+1 2016-10-14 09:44:49
lyzjc: 回帖置顶 2017-03-03 19:46:10
谢谢各位回复。
经自己的不断重复摸索，成功连接了一个，并且成功测序。今天做的菌液PCR鉴定也成功扩增出阳性克隆，已送去测序。

1、克隆相关的试剂一个都没有更换。
2、怀疑连接时间不够，把连接时间增加到6h左右。
3、怀疑与菌液浓度有关，把摇菌所加液体LB培养基增加到4ml和2ml，且都有扩增成功。

我认为一般克隆不成功的原因，再排除操作手法的原因之后，最大可能得原因有两点：
1、连接不成功
2、菌液PCR环节出了问题，最有可能就是菌液浓度。

希望给自己，也给大家一个经验参考。
赞一下(6人) 回复此楼
zhaijc@foxmail.com
15楼2016-10-13 19:46:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lemonvivi

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-14 09:44:40
xn8008: 应助指数+1 2016-10-14 09:44:53
染菌了
赞一下 回复此楼
16楼2016-10-14 09:06:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彭江容

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:22:29
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小冀- at 2016-09-28 23:54:20
菌长出来了，应该不是转化的问题，考虑是不是载体问题，会不会自连了，我们用19t，有时候假阳性特别多，p不出来，后来酶切发现全都自连的，后来换个批次就好了

换个批次是什么意思？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
17楼2016-11-07 20:44:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彭江容

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:22:33
引用回帖:
11楼: Originally posted by 小冀- at 2016-10-01 08:39:06
重新买，你想换一种载体的话也可以
...

我想问一下啊，我做的菌长出来了，做了菌液pcr，然后电泳检测，发现有特异性条带，但是测序后做序列比对差了很多，这是什么原因呢？谢谢！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
18楼2016-11-07 20:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彭江容

新虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:22:38
引用回帖:
14楼: Originally posted by wywahh at 2016-10-13 08:18:06
菌液pcr也可能出现扩不出来的情况，可以送一批去测序，做转化的时候做对照了吗，确定感受态没有问题吗？这些都没有问题，还可以摇菌提取质粒来重新扩增检测。

转化时的对照应该怎么做啊？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2016-11-07 20:51:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:24:06
引用回帖:
18楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 20:50:02
我想问一下啊，我做的菌长出来了，做了菌液pcr，然后电泳检测，发现有特异性条带，但是测序后做序列比对差了很多，这是什么原因呢？谢谢！
...

是加A连接之后测序不对吗？考虑正反的问题，反过来比对看看

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
···
20楼2016-11-07 20:51:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lyzjc 的主题更新
412/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +6 呼呼？~+123456 2026-03-24 6/300 2026-03-25 22:55 by 418490947
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。，。，。，。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 312求调剂 +5 上岸吧ZJY 2026-03-22 7/350 2026-03-25 22:20 by 544594351
[考研] 292求调剂 +6 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 7/350 2026-03-25 22:04 by 无际的草原
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭