20楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 20:51:57
是加A连接之后测序不对吗？考虑正反的问题，反过来比对看看
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21楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 20:54:05
我做的是平末端连接！你说的是反转录一下吗？
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15楼: Originally posted by lyzjc at 2016-10-13 19:46:39
谢谢各位回复。
经自己的不断重复摸索，成功连接了一个，并且成功测序。今天做的菌液PCR鉴定也成功扩增出阳性克隆，已送去测序。

1、克隆相关的试剂一个都没有更换。
2、怀疑连接时间不够，把连接时间增加到6h ...

22楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 20:56:08
不是，平末端联接方向不能确定，你把你之前做好的比对序列模版反过来在比对一下，看看对不对
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24楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 20:58:02
那能用什么软件反序列吗？
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25楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:03:25
你就把比对的序列反过来就好了，不用软件
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26楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 21:07:22
自己弄啊？那工作量不是很大？
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27楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:08:00
不大，你比对模版是啥
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28楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 21:10:43
大啊，一千多bp，是测序公司提供的
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29楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:16:01
你怎么比对的，软件还是在线BLAST...