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彭江容

新虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:24:22
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20楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 20:51:57
是加A连接之后测序不对吗?考虑正反的问题,反过来比对看看
...

我做的是平末端连接!你说的是反转录一下吗?

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21楼2016-11-07 20:54:05
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小冀-

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【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-08 09:24:32
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21楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 20:54:05
我做的是平末端连接!你说的是反转录一下吗?
...

不是,平末端联接方向不能确定,你把你之前做好的比对序列模版反过来在比对一下,看看对不对

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···
22楼2016-11-07 20:56:08
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彭江容

新虫 (小有名气)

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15楼: Originally posted by lyzjc at 2016-10-13 19:46:39
谢谢各位回复。
经自己的不断重复摸索,成功连接了一个,并且成功测序。今天做的菌液PCR鉴定也成功扩增出阳性克隆,已送去测序。

1、克隆相关的试剂一个都没有更换。
2、怀疑连接时间不够,把连接时间增加到6h ...

同新人一枚,楼主你看我看看我的问题在哪里吧!我做的菌长出来了,做了菌液pcr,然后电泳检测,发现有特异性条带,但是测序后做序列比对差了很多,这是什么原因呢?谢谢!

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23楼2016-11-07 20:56:29
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彭江容

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22楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 20:56:08
不是,平末端联接方向不能确定,你把你之前做好的比对序列模版反过来在比对一下,看看对不对
...

那能用什么软件反序列吗?

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24楼2016-11-07 20:58:02
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24楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 20:58:02
那能用什么软件反序列吗?
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你就把比对的序列反过来就好了,不用软件

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25楼2016-11-07 21:03:25
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彭江容

新虫 (小有名气)

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25楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:03:25
你就把比对的序列反过来就好了,不用软件
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自己弄啊?那工作量不是很大?

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26楼2016-11-07 21:07:22
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小冀-

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26楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 21:07:22
自己弄啊?那工作量不是很大?
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不大,你比对模版是啥

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27楼2016-11-07 21:08:00
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彭江容

新虫 (小有名气)

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27楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:08:00
不大,你比对模版是啥
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大啊,一千多bp,是测序公司提供的

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28楼2016-11-07 21:10:43
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28楼: Originally posted by 彭江容 at 2016-11-07 21:10:43
大啊,一千多bp,是测序公司提供的
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你怎么比对的,软件还是在线BLAST
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29楼2016-11-07 21:16:01
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彭江容

新虫 (小有名气)

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29楼: Originally posted by 小冀- at 2016-11-07 21:16:01
你怎么比对的,软件还是在线BLAST...

都做了,用DNAMAN跟目的片段比对相似度只有60%多,blast都没有找到相应的基因!

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30楼2016-11-07 21:18:25
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