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漠烟

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除 已有2人参与

运用CRISPR/Cas9系统,如何设计引物 构建载体?求大神相助!

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AlexandraWR

银虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:47
引用回帖:
5楼: Originally posted by 漠烟 at 2016-09-18 20:14:17
非常感谢你的解答!我现有Cas9的载体和Osu6的载体,我的基因序列全长1200bp左右,但在设计引物的时候,片段要怎样选取呢?是随机的吗?
...

有很多sgRNA的评分网站,输入你的基因名称或序列,它会给你得出所有sgRNA的分数,选高的就行,选几条先做一下转染,挑出好使的

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7楼2016-09-18 22:47:19
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AlexandraWR

银虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:18:52
楼主要说的详细一些,需要什么样的载体。cas9的载体可以从addgene上买到,sgRNA要自己设计然后连到px330之类的sgRNA骨架载体上
2楼2016-09-18 12:46:35
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didongwei

金虫 (著名写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:14
你可以联系一下华南师范大学的刘耀光老师,他们在MP上发表了改进该技术的方法,很系统。另外,如果课题组不缺钱,可以找公司做,不算贵,而且省时间。祝好

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不是优秀,而是不可替代
3楼2016-09-18 12:50:02
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:28
你可以联系一下华南师范大学的刘耀光老师,他们在MP上发表了改进该技术的方法,很系统。另外,如果课题组不缺钱,可以找公司做,不算贵,而且省时间。祝好

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不是优秀,而是不可替代
4楼2016-09-18 12:51:00
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