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漠烟

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因敲除 已有2人参与

运用CRISPR/Cas9系统，如何设计引物 构建载体？求大神相助！

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1楼 2016-09-18 10:05:01
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didongwei

金虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:14
你可以联系一下华南师范大学的刘耀光老师，他们在MP上发表了改进该技术的方法，很系统。另外，如果课题组不缺钱，可以找公司做，不算贵，而且省时间。祝好

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不是优秀，而是不可替代
3楼2016-09-18 12:50:02
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普通回帖

AlexandraWR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:18:52
楼主要说的详细一些，需要什么样的载体。cas9的载体可以从addgene上买到，sgRNA要自己设计然后连到px330之类的sgRNA骨架载体上
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2楼2016-09-18 12:46:35
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:28
你可以联系一下华南师范大学的刘耀光老师，他们在MP上发表了改进该技术的方法，很系统。另外，如果课题组不缺钱，可以找公司做，不算贵，而且省时间。祝好

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不是优秀，而是不可替代
4楼2016-09-18 12:51:00
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漠烟

新虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:34
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2楼: Originally posted by AlexandraWR at 2016-09-18 12:46:35
楼主要说的详细一些，需要什么样的载体。cas9的载体可以从addgene上买到，sgRNA要自己设计然后连到px330之类的sgRNA骨架载体上

非常感谢你的解答！我现有Cas9的载体和Osu6的载体，我的基因序列全长1200bp左右，但在设计引物的时候，片段要怎样选取呢？是随机的吗？

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5楼2016-09-18 20:14:17
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漠烟

新虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by didongwei at 2016-09-18 12:51:00
你可以联系一下华南师范大学的刘耀光老师，他们在MP上发表了改进该技术的方法，很系统。另外，如果课题组不缺钱，可以找公司做，不算贵，而且省时间。祝好

谢谢你的解答，但我们的经费还是有限的

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6楼2016-09-18 20:15:11
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AlexandraWR

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 08:19:47
引用回帖:
5楼: Originally posted by 漠烟 at 2016-09-18 20:14:17
非常感谢你的解答！我现有Cas9的载体和Osu6的载体，我的基因序列全长1200bp左右，但在设计引物的时候，片段要怎样选取呢？是随机的吗？
...

有很多sgRNA的评分网站，输入你的基因名称或序列，它会给你得出所有sgRNA的分数，选高的就行，选几条先做一下转染，挑出好使的

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7楼2016-09-18 22:47:19
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漠烟

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by AlexandraWR at 2016-09-18 22:47:19
有很多sgRNA的评分网站，输入你的基因名称或序列，它会给你得出所有sgRNA的分数，选高的就行，选几条先做一下转染，挑出好使的
...

多谢多谢！

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8楼2016-09-19 09:46:40
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做该技术服务哈

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9楼2016-09-19 13:09:14
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as1688816

木虫 (正式写手)
我在构建载体，多交流

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10楼2016-09-19 23:01:21
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