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小肉xxh

新虫 (初入文坛)

[求助] dna条带 已有2人参与

提取蛾子的dna做coii基因的pcr后，跑胶dna条带为什么这么乱

dna条带


@biostar2009 @飞约疯人院 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-09-17 13:28:40
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-18 09:02:56
先看条带里有没有你的目标带，一般引物特异性差或退火温度过低均会造成非特异性扩增而出现多条带。
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2楼2016-09-18 00:59:21
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-18 09:03:04
回忆一下，PCR反应过程中是否有过断电情况，如果没有，请检查你的引物特异性。从你的图片来看，应该是产物不单一，如果引物特异性没有问题，且PCR过程中一切正常，建议切下条带，胶回收后测序（PS：就用你扩增引物测序就可以）。如未阐述明白，可继续追问，祝好
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不是优秀，而是不可替代
3楼2016-09-18 08:41:23
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小肉xxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by didongwei at 2016-09-18 08:41:23
回忆一下，PCR反应过程中是否有过断电情况，如果没有，请检查你的引物特异性。从你的图片来看，应该是产物不单一，如果引物特异性没有问题，且PCR过程中一切正常，建议切下条带，胶回收后测序（PS：就用你扩增引物测 ...

线粒体COII基因：PCR扩增引物为针对鳞翅目设计的引物，反应程序参考刘晓燕等（2007）
正向引物EVA：5' GAGACCATTACTTGCTTTCAGTCACT 3'
反向引物PATRICK：5' CTAATATGGCAGATTATATGTATTGG 3'
PCR反应程序：94 ℃预变性1 min；94 ℃变性1min，45 ℃复性1min30s，72 ℃延伸1 min15s，6个循环；94 ℃变性1min，51 ℃复性1min30s，72 ℃延伸1 min15s，36个循环；72 ℃延伸5 min；12℃forever
这是为什么 都跑到100bp了   maker2000
dna条带-1



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4楼2016-10-15 21:55:47
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小肉xxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by didongwei at 2016-09-18 08:41:23
回忆一下，PCR反应过程中是否有过断电情况，如果没有，请检查你的引物特异性。从你的图片来看，应该是产物不单一，如果引物特异性没有问题，且PCR过程中一切正常，建议切下条带，胶回收后测序（PS：就用你扩增引物测 ...

这是图
dna条带-2



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5楼2016-10-15 22:06:53
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小肉xxh at 2016-10-15 22:06:53
这是图

...

你的问题嘞？条带不清晰？

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不是优秀，而是不可替代
6楼2016-10-15 22:08:06
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小肉xxh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by didongwei at 2016-10-15 22:08:06
你的问题嘞？条带不清晰？
...

那个应该跑到maker的第三条带，可是都到100得条带了

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7楼2016-10-15 22:10:10
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didongwei

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小肉xxh at 2016-10-15 22:10:10
那个应该跑到maker的第三条带，可是都到100得条带了
...

你的不是跑到100bp啦，100bp那是引物二聚体或者DNA片段，从你的电泳图看，我认为是复性温度太低，导致特异性差

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不是优秀，而是不可替代
8楼2016-10-15 22:12:35
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