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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02
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0220zy

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02 已有4人参与

第一次提RNA，用的是TIANGEN动物组织柱式RNA提取试剂盒，操作过程挺小心
用NanoDrop测得OD260/280为2.02
然后跑电泳，电泳条带完全弥散，看不出什么东西，肯定是被污染了
在RNA样品与Loading Buffer混合时，在封口膜上进行，是不是在这里RNA降解了？其他操作感觉不太会出现降解的可能啊

求大神指点迷津？

RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02
OD260/280.jpg


RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02-1
电泳失败图.jpg
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1楼 2016-09-14 20:37:00
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:15
The RNA is degraded. Special attention and procedure must be taken . Using a RNA isolation kit to avoid the problem. Did you use a kit? or you made it by homemade solution?
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3楼2016-09-15 23:21:35
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:08
看电泳图，你这是降解了啊，应该是RNase污染，另外，你的A230比较高，一般A260/A230有2.0以上。建议提之前彻底处理水以及用品，另外用乙醇洗RNA之后，晾干15min之后再加水溶解。祝实验成功！
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ATGC
2楼2016-09-15 22:51:15
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:21
操作过程中，手要经常喷RNA酶清除剂或者是DEPC水，工作台面在用之前也要用DEPC或者RNA酶清除剂处理，然后就是EP管和枪头，建议买稍微好点的明确是RNase Free的。
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ATGC
4楼2016-09-15 23:36:30
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guess110

新虫 (著名写手)
下次可以不用加loading buffer，直接空跑，因为loading buffer可能有RNA酶！

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5楼2016-09-17 19:33:12
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痕毋量

新虫 (初入文坛)
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7楼2016-09-18 09:39:54
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by guess110 at 2016-09-19 07:47:46
没关系，我跑出来了，很漂亮的图！
...

只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧，loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer，点样的时候用的是点样针还是移液枪呢？
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14楼2016-09-20 08:45:46
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-20 22:48:23
胶要现配现用，电泳缓冲液也是需要每天更换新的。
其他的你也很注意了，重新电泳一次吧，RNA应该没问题，反转然后做PCR没问题的
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有你真好
15楼2016-09-20 13:54:46
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guess110

新虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 0220zy at 2016-09-20 08:45:46
只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧，loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer，点样的时候用的是点样针还是移液枪呢？...

移液枪，我在第一孔加maker,跑RNA的时候啥也没加（只加总RNA），看maker跑的位置，来确定是否停止电泳！

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16楼2016-09-20 21:33:16
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普通回帖

0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by guess110 at 2016-09-17 19:33:12
下次可以不用加loading buffer，直接空跑，因为loading buffer可能有RNA酶！

不加loading buffer能够跑出电泳图么？RNA会飘在胶孔上吧？也没法看出电泳跑的情况
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6楼2016-09-18 09:33:39
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南川子

铁虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:31:14
你这降解得太彻底了，很可能是那个过程中引入了RNase，个人觉得溶解的水和loading buffer 的嫌疑较大，建议换新的试试。

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8楼2016-09-18 22:12:58
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南川子

铁虫 (正式写手)
还有TAE(TBE)也有可能有RNase污染

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9楼2016-09-18 22:15:29
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guess110

新虫 (著名写手)
内容已删除
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10楼2016-09-19 07:47:46
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