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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-09-15 22:51:15
看电泳图，你这是降解了啊，应该是RNase污染，另外，你的A230比较高，一般A260/A230有2.0以上。建议提之前彻底处理水以及用品，另外用乙醇洗RNA之后，晾干15min之后再加水溶解。祝实验成功！

A230较高一般是什么原因造成的呢？A260/A230又有什么可能因素造成的？
我按照试剂盒上的步骤操作，试剂都是试剂盒里的，水也是ddH2O
但是电泳过程降解也不会降解的这么彻底吧，可能还是提的过程中降解了
求大神回复
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11楼2016-09-20 08:37:22
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Forest666 at 2016-09-15 23:36:30
操作过程中，手要经常喷RNA酶清除剂或者是DEPC水，工作台面在用之前也要用DEPC或者RNA酶清除剂处理，然后就是EP管和枪头，建议买稍微好点的明确是RNase Free的。

好的  我买了RNase Free的枪头和RNA酶清除剂
这次用这些试试  看看效果怎么样
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12楼2016-09-20 08:38:24
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 南川子 at 2016-09-18 22:15:29
还有TAE(TBE)也有可能有RNase污染

会买新的loading buffer和TBE，制胶用的锥形瓶用不用也灭一下菌，胶的质量会不会也能造成RNA的降解？
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13楼2016-09-20 08:43:04
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0220zy

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by guess110 at 2016-09-19 07:47:46
没关系，我跑出来了，很漂亮的图！
...

只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧，loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer，点样的时候用的是点样针还是移液枪呢？
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14楼2016-09-20 08:45:46
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-20 22:48:23
胶要现配现用，电泳缓冲液也是需要每天更换新的。
其他的你也很注意了，重新电泳一次吧，RNA应该没问题，反转然后做PCR没问题的
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有你真好
15楼2016-09-20 13:54:46
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guess110

新虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 0220zy at 2016-09-20 08:45:46
只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧，loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer，点样的时候用的是点样针还是移液枪呢？...

移液枪，我在第一孔加maker,跑RNA的时候啥也没加（只加总RNA），看maker跑的位置，来确定是否停止电泳！

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16楼2016-09-20 21:33:16
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匿名

用户注销 (著名写手)
本帖仅楼主可见
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17楼2016-09-22 22:18:26
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