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0220zy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Forest666 at 2016-09-15 22:51:15
看电泳图,你这是降解了啊,应该是RNase污染,另外,你的A230比较高,一般A260/A230有2.0以上。建议提之前彻底处理水以及用品,另外用乙醇洗RNA之后,晾干15min之后再加水溶解。祝实验成功!

A230较高一般是什么原因造成的呢?A260/A230又有什么可能因素造成的?
我按照试剂盒上的步骤操作,试剂都是试剂盒里的,水也是ddH2O
但是电泳过程降解也不会降解的这么彻底吧,可能还是提的过程中降解了
求大神回复
11楼2016-09-20 08:37:22
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0220zy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Forest666 at 2016-09-15 23:36:30
操作过程中,手要经常喷RNA酶清除剂或者是DEPC水,工作台面在用之前也要用DEPC或者RNA酶清除剂处理,然后就是EP管和枪头,建议买稍微好点的明确是RNase Free的。

好的  我买了RNase Free的枪头和RNA酶清除剂
这次用这些试试  看看效果怎么样
12楼2016-09-20 08:38:24
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0220zy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 南川子 at 2016-09-18 22:15:29
还有TAE(TBE)也有可能有RNase污染

会买新的loading buffer和TBE,制胶用的锥形瓶用不用也灭一下菌,胶的质量会不会也能造成RNA的降解?
13楼2016-09-20 08:43:04
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0220zy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by guess110 at 2016-09-19 07:47:46
没关系,我跑出来了,很漂亮的图!
...

只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧,loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer,点样的时候用的是点样针还是移液枪呢?
14楼2016-09-20 08:45:46
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a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-20 22:48:23
胶要现配现用,电泳缓冲液也是需要每天更换新的。
其他的你也很注意了,重新电泳一次吧,RNA应该没问题,反转然后做PCR没问题的
有你真好
15楼2016-09-20 13:54:46
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guess110

新虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 0220zy at 2016-09-20 08:45:46
只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧,loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer,点样的时候用的是点样针还是移液枪呢?...

移液枪,我在第一孔加maker,跑RNA的时候啥也没加(只加总RNA),看maker跑的位置,来确定是否停止电泳!

发自小木虫Android客户端
16楼2016-09-20 21:33:16
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匿名

用户注销 (著名写手)

本帖仅楼主可见
17楼2016-09-22 22:18:26
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