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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02
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0220zy

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02已有4人参与

第一次提RNA，用的是TIANGEN动物组织柱式RNA提取试剂盒，操作过程挺小心
用NanoDrop测得OD260/280为2.02
然后跑电泳，电泳条带完全弥散，看不出什么东西，肯定是被污染了
在RNA样品与Loading Buffer混合时，在封口膜上进行，是不是在这里RNA降解了？其他操作感觉不太会出现降解的可能啊

求大神指点迷津？

RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02
OD260/280.jpg


RNA电泳跑失败，Nanodrop测得OD260/280为2.02-1
电泳失败图.jpg
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1楼2016-09-14 20:37:00
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guess110

新虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 0220zy at 2016-09-20 08:45:46
只要有Gel Green或者Gel Red就能够看出条带是吧，loading buffer只是为了让RNA沉降和观察电泳进程是吧
那你不用loading buffer，点样的时候用的是点样针还是移液枪呢？...

移液枪，我在第一孔加maker,跑RNA的时候啥也没加（只加总RNA），看maker跑的位置，来确定是否停止电泳！

发自小木虫Android客户端
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16楼2016-09-20 21:33:16
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:08
看电泳图，你这是降解了啊，应该是RNase污染，另外，你的A230比较高，一般A260/A230有2.0以上。建议提之前彻底处理水以及用品，另外用乙醇洗RNA之后，晾干15min之后再加水溶解。祝实验成功！
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ATGC
2楼2016-09-15 22:51:15
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yuy111

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:15
The RNA is degraded. Special attention and procedure must be taken . Using a RNA isolation kit to avoid the problem. Did you use a kit? or you made it by homemade solution?
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3楼2016-09-15 23:21:35
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Forest666

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-16 08:00:21
操作过程中，手要经常喷RNA酶清除剂或者是DEPC水，工作台面在用之前也要用DEPC或者RNA酶清除剂处理，然后就是EP管和枪头，建议买稍微好点的明确是RNase Free的。
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ATGC
4楼2016-09-15 23:36:30
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