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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸杂交 » 萌新求助各位大神，帮我分析下Southern的结果，小条带都弥散了显示不出来，急！！！
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)

[求助] 萌新求助各位大神，帮我分析下Southern的结果，小条带都弥散了显示不出来，急！！！

如题，Southern实验，检测我的探针（大小约300bp），Marker在2KB以下的条带全弥散了看不见，我的探针也是一坨，根本不成一条带，有木有大神遇见过类似的情况啊，帮我分析下原因，谢谢了！泳道1：未标记的Marker；泳道2：Dig标记的Marker；泳道3：探针。重复了几次，每次都是这样！

萌新求助各位大神，帮我分析下Southern的结果，小条带都弥散了显示不出来，急！！！
2016.9.5-2.jpg
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1楼 2016-09-14 09:12:10
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:34
探针的有可能是信号太强
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jiayoubashaonian
4楼2016-09-14 11:33:23
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:29
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2016-09-14 11:24:14
请问楼主为何要标记marker？不是直接将探针点在尼龙膜上检测吗？

我不是要标记marker，我的意思是那个marker就是含有地高辛的southern用的marker，但是我显色时发现小片段显不出来

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3楼2016-09-14 11:31:32
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armigera

金虫 (正式写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:33:44
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:45
其实你的探针泳道还好，就是上样量有点多，或者减少显色时间。至于marker，有没有可能本身就有问题呢，因为从跑胶的图来看，好像小条带都弥散到看不出来。或者显色液只淋了膜的下半部？

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6楼2016-09-16 14:17:35
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armigera

金虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by winyuyuyu123 at 2016-09-19 11:57:31
是的，有可能是显色比较灵敏，但是同样的500bp的Marker应该显色也很灵敏，Marker的小条带不应该完全看不出来的，从转膜结果看，500bp的条带没有转膜完全，但是连2kb的都显示清晰了呢。。。其实我想确定一下到底是不 ...

有很多方法可以满足你的要求，但都没法进行后续实验，显色过后的膜也就不能再用了。比如，常见的，你可以用传统的DAB显色，或者用碱性磷酸酶与bcip+nip(?我太确定这两个名字)，总之有很多，他们显色的结果直接显示在膜上，一旦曝光过度就要重新做实验。其实也可以怀疑marker降解了，这个只是一个猜测。

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11楼2016-09-20 05:20:19
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:23
请问楼主为何要标记marker？不是直接将探针点在尼龙膜上检测吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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jiayoubashaonian
2楼2016-09-14 11:24:14
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:39
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackrose8089 at 2016-09-14 11:33:23
探针的有可能是信号太强

可是探针和marker都是这样，看marker上面2kb的条带挺正常的，小条带就不见了，我怀疑是不是转膜的时候弄散的

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5楼2016-09-14 11:41:09
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-19 13:58:50
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6楼: Originally posted by armigera at 2016-09-16 14:17:35
其实你的探针泳道还好，就是上样量有点多，或者减少显色时间。至于marker，有没有可能本身就有问题呢，因为从跑胶的图来看，好像小条带都弥散到看不出来。或者显色液只淋了膜的下半部？
...

是的，我奇怪的是，marker上面至少能看清500bp的条带，但是膜显色的时候弥散了，我现在怀疑转膜步骤是不是有些问题。探针的电泳条带其实也不是很亮，最终显色怎么会那么强
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7楼2016-09-18 13:53:24
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armigera

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-18 22:34:03
xn8008: 应助指数+1 2016-09-19 13:59:05
winyuyuyu123: 金币+1, ★有帮助 2016-09-20 09:59:00
southern的探针检测本来就很灵敏，跑胶看不出来的条带或弥散不代表没有，探针完全可以抗的出来。不然就没人做southern了，直接跑胶就可以了。

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8楼2016-09-18 16:42:41
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star013

新虫 (知名作家)
xn8008: 屏蔽内容, 违规存档 2016-09-19 13:59:12
本帖内容被屏蔽
9楼2016-09-18 18:02:36
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winyuyuyu123

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by armigera at 2016-09-18 16:42:41
southern的探针检测本来就很灵敏，跑胶看不出来的条带或弥散不代表没有，探针完全可以抗的出来。不然就没人做southern了，直接跑胶就可以了。

是的，有可能是显色比较灵敏，但是同样的500bp的Marker应该显色也很灵敏，Marker的小条带不应该完全看不出来的，从转膜结果看，500bp的条带没有转膜完全，但是连2kb的都显示清晰了呢。。。其实我想确定一下到底是不是显色的原因，所以想看看条带在膜上的具体情况，不知道有没有什么染色的方法能在膜上看看我的条带是不是弥散的呢？
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10楼2016-09-19 11:57:31
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