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liling0601铜虫 (小有名气)
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[求助]
基因扩增 已有2人参与
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| 近期做一个1000bp的小片段扩增，结果非目的条带比目的条带亮很多，挑5个单菌落测序回来，5个都一样，和引物比对发现测序结果的引物倒数第二个碱基由A变成了T，请问这是引物设计问题还是退火温度设计的不合适？如何调整 |
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6楼2016-09-13 20:42:07
010308Jing
木虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
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- 散金: 73
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- 帖子: 552
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- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2016-09-12 16:29:01
3楼2016-09-12 20:55:56
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-13 08:11:16
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-13 08:11:16
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It is not accurate in the primer annealing, and the PCR system is error prong. You can use your system to do mutagenesis now. I am not kidding. But if you do not need a mutagenesis PCR, so adjust all conditions of PCR including primer design to stricken the PCR. You need to know the rules to design the PCR, besides, PCR buffer and concentration, anealing temperature, etc all must be optimized. Please let me know if you cannot make it work. |
4楼2016-09-13 00:14:11