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好崩溃，农杆菌P不出rol B,rol C 片段，菌是不是挂了 已有2人参与
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做单子叶植物的发状根诱导，从小木虫上求赠到3株菌：A4，15834，K599，隔壁实验室给了我一株C58C1，都一起用来诱导了。 100μg/L乙酰丁香酮+愈伤组织培养基（含激素），诱导多次，A4、K599没反应，C58c1和15834可以诱导出不定根，但是不会继续生长，看起来不像毛状根。万般无奈就想检测rol B,rol C 片段，提取了不定根和植物的DNA（CATB法），菌液离心、重悬、煮沸、取上清做模板，作为阳性对照。 结果出来，根和植物没有目的片段意料之中，但是菌液结果很意外。maker左边是rolC，右边是rolB。 C58c1条带都在（300bp附近,600bp附近），但是，15834，K599的rol B条带大小和C58c1不一样（400bp附近），rol C没有条带！A4一个条带都没！！ rolB-F GCTCTTGCAGTGCTAGATTT rolB-R GAAGGTGCAAGCTACCTCTC rolC-f CTCCTGACATCAAACTCGTC rolC-r TGCTTCGAGTTATGGGTACA 查了文献，有报道A4用这两个引物产物rol B是720bp,rol C是 540bp；有报道但是我在NCBI上primer blast得到的分别是423 612bp 请问 1. 15834，K599的rol B条带大小和C58c1不一样，合理吗？是否不同菌种的发根农杆菌用这段引物P出来的都不一样。 2. 是不是除了C58c1，其他菌的质粒丢失了？不可能得到毛状根了。 3.单子叶诱导毛状根要从改进哪些条件入手？看已经发表的露水草、玉米、穿龙薯芋感觉没那么难，但是就是不成功，好吧，或许菌根本不对。。  发根农杆菌.png |
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3楼2016-11-29 22:08:35
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