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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 好崩溃，农杆菌P不出rol B,rol C 片段，菌是不是挂了
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

[求助] 好崩溃，农杆菌P不出rol B,rol C 片段，菌是不是挂了 已有2人参与

做单子叶植物的发状根诱导，从小木虫上求赠到3株菌：A4，15834，K599，隔壁实验室给了我一株C58C1，都一起用来诱导了。

100μg/L乙酰丁香酮+愈伤组织培养基（含激素），诱导多次，A4、K599没反应，C58c1和15834可以诱导出不定根，但是不会继续生长，看起来不像毛状根。万般无奈就想检测rol B,rol C 片段，提取了不定根和植物的DNA（CATB法），菌液离心、重悬、煮沸、取上清做模板，作为阳性对照。

结果出来，根和植物没有目的片段意料之中，但是菌液结果很意外。maker左边是rolC，右边是rolB。

C58c1条带都在（300bp附近,600bp附近），但是，15834，K599的rol B条带大小和C58c1不一样（400bp附近），rol C没有条带！A4一个条带都没！！

rolB-F        
GCTCTTGCAGTGCTAGATTT

rolB-R        
GAAGGTGCAAGCTACCTCTC

rolC-f        
CTCCTGACATCAAACTCGTC
      
rolC-r        
TGCTTCGAGTTATGGGTACA

查了文献，有报道A4用这两个引物产物rol B是720bp,rol C是 540bp；有报道但是我在NCBI上primer blast得到的分别是423
612bp


请问
1.  15834，K599的rol B条带大小和C58c1不一样，合理吗？是否不同菌种的发根农杆菌用这段引物P出来的都不一样。
2.  是不是除了C58c1，其他菌的质粒丢失了？不可能得到毛状根了。
3.单子叶诱导毛状根要从改进哪些条件入手？看已经发表的露水草、玉米、穿龙薯芋感觉没那么难，但是就是不成功，好吧，或许菌根本不对。。

好崩溃，农杆菌P不出rol B,rol C 片段，菌是不是挂了
发根农杆菌.png
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1楼 2016-09-09 09:54:10
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
顶贴
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2楼2016-09-09 16:31:38
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最-难忘

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做大型木本的 到现在都没有成功  啊  哎。。楼主加油啊 啊 共勉  
别人用C58C1很快就诱导出来了  自己的做了很久都没出来 哎呀
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3楼2016-11-29 22:08:35
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 最-难忘 at 2016-11-29 22:08:35
我做大型木本的 到现在都没有成功  啊  哎。。楼主加油啊 啊 共勉  
别人用C58C1很快就诱导出来了  自己的做了很久都没出来 哎呀

单子叶做了一年半，还没出来，要哭了……

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-11-29 23:20:02
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红珍老师

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您的c5851可以赠送点给我吗
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5楼2018-06-15 21:38:55
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