| 查看: 2302 | 回复: 6 | |||
15871472357金虫 (小有名气)
|
[交流]
反向PCR
|
|
我要从gDNA扩一个基因，怎么也扩不出来，然后文献用的是反向PCR法，可是我看了，还是不懂怎么操作的，求各位了解反向pcr的大神给翻译翻译，谢谢，小弟散金求结果，因为马上要开组会了 疑问：1、刚开始酶切gDNA用的是什么内切酶？ 2、为什么后面加入25ul的反应体系，加的模板是3ul的环话模板，为什么不是第二次酶切的模板？ 3、为什么gDNA要经过滤膜过滤？  360截图20160908152938371.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有187人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
star013 
新虫 (知名作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1488.5
- 散金: 831
- 红花: 33
- 帖子: 5395
- 在线: 493.3小时
- 虫号: 1401381
- 注册: 2011-09-14
- 专业: 法学
2楼2016-09-08 15:43:22
15871472357
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 890.1
- 散金: 177
- 帖子: 113
- 在线: 95小时
- 虫号: 3663267
- 注册: 2015-01-25
- 专业: 兽医寄生虫学
3楼2016-09-08 20:55:53
15871472357
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 890.1
- 散金: 177
- 帖子: 113
- 在线: 95小时
- 虫号: 3663267
- 注册: 2015-01-25
- 专业: 兽医寄生虫学
4楼2016-09-08 20:58:18
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
15871472357: 金币+1 2016-09-21 16:19:41
15871472357: 金币+1 2016-09-21 16:19:50
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
15871472357: 金币+1 2016-09-21 16:19:41
15871472357: 金币+1 2016-09-21 16:19:50
| 反向PCR一般用于从一段已知序列扩增两侧未知序列，参考文献选择SwaI是一个识别8个碱基的酶切位点，应该是在已知序列中不存在识别位点的酶，而且需要扩增的两侧序列比较长，才需要识别8的碱基的内切酶。酶切连接环化，就成了一个类似质粒的环状DNA，可以从已知序列向两外侧扩增。扩增产物测序，找到酶切位点，比如参考文献的是SwaI，以此为止模拟切开，得到已知序列两外侧到酶切位点之间的序列信息。 |
5楼2016-09-13 16:42:50
15871472357
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 890.1
- 散金: 177
- 帖子: 113
- 在线: 95小时
- 虫号: 3663267
- 注册: 2015-01-25
- 专业: 兽医寄生虫学
6楼2016-09-21 16:19:26
7楼2016-09-21 23:55:48