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liunian1213

铜虫 (小有名气)

[求助] 小分子蛋白电泳前样品的处理 已有1人参与

我是刚刚开始做蛋白方面,很多问题不明白,请大家多多指点
我提取的蛋白是用酶解法,想做一个tricice sds page,   marker的条带很清楚,但样品没有条带,怀疑样品蛋白浓度太低,用bca法测了蛋白含量为0.133mg/ml,随后用丙酮浓缩了蛋白,刚开始沉淀物很粘稠像橡皮筋那种感觉,很有弹性,后来我放在50℃烘箱烘干,但是现在蛋白变成很硬的一坨,不溶于水,这样的蛋白可以直接溶于样品缓冲液做电泳吗?如果不行需要怎么处理呢?我是不是哪一步做错了?
恳请大家多多指点,谢谢大家

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shadow_liu

新虫 (初入文坛)

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感谢参与,应助指数 +1
liunian1213: 金币+1 2016-09-08 19:04:26
你的蛋白浓度挺高的,应该是没有问题,但是你后续为什么要烘干?是必须的吗?我没有烘干过,一般加过buffer以后才加热变性
2楼2016-09-08 17:15:26
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liunian1213

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shadow_liu at 2016-09-08 17:15:26
你的蛋白浓度挺高的,应该是没有问题,但是你后续为什么要烘干?是必须的吗?我没有烘干过,一般加过buffer以后才加热变性

因为电泳时没有条带,我就想要不要浓缩一下蛋白质,除丙酮时感觉有残留,就烘干了,我是用水提的,直接加入上样缓冲液,会有影响吗?谢谢你

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3楼2016-09-08 19:03:30
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shadow_liu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


liunian1213: 金币+1, 有帮助 2016-09-09 16:41:28
你最开始上样浓度是多大?一般超过40ug,蛋白条带应该可以显示出来的,有的浓度更低点也可以,你的内参条带怎么样
4楼2016-09-09 08:58:33
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liunian1213

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shadow_liu at 2016-09-09 08:58:33
你最开始上样浓度是多大?一般超过40ug,蛋白条带应该可以显示出来的,有的浓度更低点也可以,你的内参条带怎么样

marker条带很清晰,上样量20微摩,40的把样品口太小加不进去,请问样品是水提的,不用处理直接加buffer可以吗?我是用丙酮浓缩了,浓缩完要干燥吗?我干燥完发现水溶解不了了,样品需要如何处理么?

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5楼2016-09-09 16:41:00
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shadow_liu

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by liunian1213 at 2016-09-09 16:41:00
marker条带很清晰,上样量20微摩,40的把样品口太小加不进去,请问样品是水提的,不用处理直接加buffer可以吗?我是用丙酮浓缩了,浓缩完要干燥吗?我干燥完发现水溶解不了了,样品需要如何处理么?
...

你浓度搞得话,没必要用丙酮浓缩蛋白了,你做的时候是不是温度太高了?最好低温
6楼2016-09-10 18:14:56
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liunian1213

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by shadow_liu at 2016-09-10 18:14:56
你浓度搞得话,没必要用丙酮浓缩蛋白了,你做的时候是不是温度太高了?最好低温...

我是在冰上操作的,我再重新试一次,谢谢啦

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7楼2016-09-11 09:28:52
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悠心粉黛

铜虫 (初入文坛)

请问:你的样品缓冲液的配方是什么

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8楼2016-12-11 19:10:37
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