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zhao_student

新虫 (小有名气)

[交流] 基因组和cDNA为模版PCR 已有5人参与

以cDNA为模版做PCR,结果没有杂带,可是以基因组为模版做PCR,结果中有很多杂带,这是怎么回事儿啊?

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匿名

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myprayer: 金币+1, 应助指数+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-09-08 19:05:20
xn8008: 应助指数+1 2016-09-10 06:28:10
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2楼2016-09-07 21:10:53
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zhao_student

新虫 (小有名气)

xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:28:15
引用回帖:
2楼: Originally posted by becklittle at 2016-09-07 21:10:53
这很正常,引物不特异,cdna就那么点序列,基因组序列多了去了

有可能基因组结果序列大小要比cDNA结果小吗?

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3楼2016-09-07 21:50:24
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tayifeita

木虫 (小有名气)

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-09-08 19:05:30
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:28:21
xn8008: 金币+1, 应助指数+1 2016-09-10 06:28:26
咦?有条带了吗,基因组序列只有比Cdna序列大的或等于的,而且引物如果20bp的话,3‘端10个bp搭上去了都有可能扩出来
4楼2016-09-08 13:25:46
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rovely1226

铁虫 (初入文坛)

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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:28:37
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhao_student at 2016-09-07 21:50:24
有可能基因组结果序列大小要比cDNA结果小吗?
...

当然有可能,非特异的扩增任何大小都有可能的。
5楼2016-09-10 00:35:42
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yuy111

银虫 (正式写手)


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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:28:44
None specific PCR, the conditions of PCR is not so strict. Please contact:  roysally@outlook.com  for more help .
6楼2016-09-10 01:13:52
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)


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xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:28:49
引物设计有跨内含子吗?如果又跨内含子,说不定,你基因组扩的片段就不是你需要的片段。
7楼2016-09-10 04:37:19
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zhao_student

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tayifeita at 2016-09-08 13:25:46
咦?有条带了吗,基因组序列只有比Cdna序列大的或等于的,而且引物如果20bp的话,3‘端10个bp搭上去了都有可能扩出来

嗯嗯,有条带了,但是杂带很多,我换了一种酶。该怎样减少杂带呢?

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8楼2016-09-10 10:33:02
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zhao_student

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 世外清风 at 2016-09-10 04:37:19
引物设计有跨内含子吗?如果又跨内含子,说不定,你基因组扩的片段就不是你需要的片段。

就是不能确定引物是不是跨内含子,要怎么确定是不是跨内含子你知道该怎么做吗?

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9楼2016-09-10 10:35:42
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhao_student at 2016-09-10 10:35:42
就是不能确定引物是不是跨内含子,要怎么确定是不是跨内含子你知道该怎么做吗?
...

NCBI上调出基因组序列,比对一下就知道了
10楼2016-09-11 21:43:45
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