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shuangzi8761银虫 (著名写手)
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[求助]
毛壳纤维素酶基因RT-PCR无带
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小弟要从RNA水平反转录到cDNA，然后扩增纤维素酶基因全长，因为这个毛壳属菌的基因组几经公布了，直接设计引物做PCR扩全长即可。但是每次做完RT-PCR，电泳检测均没有目的带，求教各位，是何问题，该如何解决?? 附RNA电泳图，和RT-PCR电泳图。 （用的CMC诱导培养基培养菌，培养2-3天，RNA没问题，之前RT-PCR做了45-60度的退火梯度均无带，所有的试剂都是新换的，反转录用了TAKARA和transgen的盒子均无带，引物用DNA做模版能扩出来，说明引物和退火温度没有问题）  RNA 选的第一条 浓度在1800ug/ml 260/280=2.06  前两条为cDNA模版，后一条为DNA模版，试剂和反应条件均一样，2k的maker,目的带800左右 |
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2楼2012-09-05 17:17:07
shuangzi8761
银虫 (著名写手)
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3楼2012-09-05 20:33:40