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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毛壳纤维素酶基因RT-PCR无带
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)

[求助] 毛壳纤维素酶基因RT-PCR无带

小弟要从RNA水平反转录到cDNA，然后扩增纤维素酶基因全长，因为这个毛壳属菌的基因组几经公布了，直接设计引物做PCR扩全长即可。但是每次做完RT-PCR，电泳检测均没有目的带，求教各位，是何问题，该如何解决??
附RNA电泳图，和RT-PCR电泳图。
（用的CMC诱导培养基培养菌，培养2-3天，RNA没问题，之前RT-PCR做了45-60度的退火梯度均无带，所有的试剂都是新换的，反转录用了TAKARA和transgen的盒子均无带，引物用DNA做模版能扩出来，说明引物和退火温度没有问题）

RNA 选的第一条 浓度在1800ug/ml 260/280=2.06



前两条为cDNA模版，后一条为DNA模版，试剂和反应条件均一样，2k的maker,目的带800左右
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1楼 2012-09-05 10:30:22
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)

资深潜水者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
shuangzi8761: 金币+5, ★有帮助 2012-09-05 19:46:20
这种情况有2个可能的原因：1 这个基因在你提RNA的材料里是否表达？
2  反转录是否成功？
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逐渐失去棱角
2楼2012-09-05 17:17:07
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaowei706 at 2012-09-05 17:17:07
这种情况有2个可能的原因：1 这个基因在你提RNA的材料里是否表达？
2  反转录是否成功？

我之前认为是反转录的问题 让师哥和别的实验室同学帮忙做了一遍 pcr后还是没带 现在也是考虑可能这个家族的基因没有表达 已经送其他几个家族的基因去合成引物 试一试看看能不能扩出来
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3楼2012-09-05 20:33:40
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