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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑pcr出现拖带是怎么回事
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)

[交流] 跑pcr出现拖带是怎么回事

如题，以前从没出现过这种情况，这是梯度pcr，这样说明是不是也有条带？

跑pcr出现拖带是怎么回事


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1楼 2016-09-07 17:02:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

18207496520

新虫 (小有名气)
★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:18
引物有问题，浓度不够

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4楼2016-09-07 17:38:35
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18207496520 at 2016-09-07 17:38:35
引物有问题，浓度不够

这种情况是浓度太高还是太低的问题呢？还是说是引物设计的问题

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5楼2016-09-07 17:41:00
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534720018

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:35
有引物二聚体，引物活性可以。单独点一个模板，看是不是DNA模板降解

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7楼2016-09-07 18:23:00
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:42
引用回帖:
7楼: Originally posted by 534720018 at 2016-09-07 18:23:00
有引物二聚体，引物活性可以。单独点一个模板，看是不是DNA模板降解

模板是cdna，用另外一对引物条带非常亮，但是上次做的有条带，就是不是特别亮

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8楼2016-09-08 02:10:13
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rainboy3529

铁虫 (著名写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:47
重新优化下引物

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9楼2016-09-08 08:06:14
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yuy111

银虫 (正式写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
primers may be not so specific ,
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10楼2016-09-08 08:47:32
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魔鬼的天使

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+5, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:31:01
不知道在哪看到的，觉得不错就备份了一下。你看看，可能会帮助到你。好像是位虫友总结的，可惜找不到原帖了

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
（7）退火温度过低。
（8）电泳体系有问题：
     ①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
     ②凝胶没有凝固好；
     ③琼脂糖质量差。
（9）若为PCR试剂盒则可能：
     ①由于运输储存不当引起试剂盒失效；
     ②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
（10）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。
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苯丙氨酸-PAL
11楼2016-09-08 16:31:22
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 魔鬼的天使 at 2016-09-08 16:31:22
不知道在哪看到的，觉得不错就备份了一下。你看看，可能会帮助到你。好像是位虫友总结的，可惜找不到原帖了

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。 ...

太感谢了！最近又跑了一张图，有条带，但弥散依然很严重！

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12楼2016-09-09 09:45:27
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
跑pcr出现拖带是怎么回事-1

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13楼2016-09-09 09:45:48
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-07 17:41:00
这种情况是浓度太高还是太低的问题呢？还是说是引物设计的问题
...

引物浓度有可能，但这对引物扩增别的模板条带也正常……

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14楼2016-09-09 09:48:16
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-08 08:47:32
primers may be not so specific ,

但扩增另一个模板条带挺好的……

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15楼2016-09-09 09:48:49
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苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by rainboy3529 at 2016-09-08 08:06:14
重新优化下引物

请问你的意思是重新设计引物还是做个引物浓度梯度？

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16楼2016-09-09 09:49:40
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魔鬼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:45:27
太感谢了！最近又跑了一张图，有条带，但弥散依然很严重！
...

试试优化引物浓度吧，我觉得引物应该没问题
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17楼2016-09-09 17:14:29
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rainboy3529

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:49:40
请问你的意思是重新设计引物还是做个引物浓度梯度？
...

先试下引物浓度，不行的话，就要重新设计一下
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18楼2016-09-09 23:18:31
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Sunshineboy

银虫 (小有名气)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
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13楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:45:48

这是怎么调整后跑出来的图片啊

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19楼2017-02-14 16:34:31
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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
引物特异性不够，典型问题

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20楼2017-02-15 10:07:56
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dsctg2楼
2016-09-07 17:04   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
tangbohejin3楼
2016-09-07 17:09   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
syhorchid6楼
2016-09-07 18:19   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
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