应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 跑pcr出现拖带是怎么回事
201/1返回列表
查看: 8501  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)

[交流] 跑pcr出现拖带是怎么回事

如题，以前从没出现过这种情况，这是梯度pcr，这样说明是不是也有条带？

跑pcr出现拖带是怎么回事


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-09-07 17:02:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

18207496520

新虫 (小有名气)
★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:18
引物有问题，浓度不够

发自小木虫IOS客户端
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-09-07 17:38:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by 18207496520 at 2016-09-07 17:38:35
引物有问题，浓度不够

这种情况是浓度太高还是太低的问题呢？还是说是引物设计的问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-09-07 17:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

534720018

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:35
有引物二聚体，引物活性可以。单独点一个模板，看是不是DNA模板降解

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-09-07 18:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:42
引用回帖:
7楼: Originally posted by 534720018 at 2016-09-07 18:23:00
有引物二聚体，引物活性可以。单独点一个模板，看是不是DNA模板降解

模板是cdna，用另外一对引物条带非常亮，但是上次做的有条带，就是不是特别亮

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-09-08 02:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainboy3529

铁虫 (著名写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:47
重新优化下引物

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
9楼2016-09-08 08:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuy111

银虫 (正式写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
primers may be not so specific ,
赞一下 回复此楼
10楼2016-09-08 08:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔鬼的天使

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+5, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:31:01
不知道在哪看到的，觉得不错就备份了一下。你看看，可能会帮助到你。好像是位虫友总结的，可惜找不到原帖了

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。
（2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。
（3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。
（4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。
（5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。
（6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。
（7）退火温度过低。
（8）电泳体系有问题：
     ①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大；
     ②凝胶没有凝固好；
     ③琼脂糖质量差。
（9）若为PCR试剂盒则可能：
     ①由于运输储存不当引起试剂盒失效；
     ②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。
（10）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

苯丙氨酸-PAL
11楼2016-09-08 16:31:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by 魔鬼的天使 at 2016-09-08 16:31:22
不知道在哪看到的，觉得不错就备份了一下。你看看，可能会帮助到你。好像是位虫友总结的，可惜找不到原帖了

3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散
（1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。 ...

太感谢了！最近又跑了一张图，有条带，但弥散依然很严重！

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2016-09-09 09:45:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
跑pcr出现拖带是怎么回事-1

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-09-09 09:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-07 17:41:00
这种情况是浓度太高还是太低的问题呢？还是说是引物设计的问题
...

引物浓度有可能，但这对引物扩增别的模板条带也正常……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-09-09 09:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yuy111 at 2016-09-08 08:47:32
primers may be not so specific ,

但扩增另一个模板条带挺好的……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
15楼2016-09-09 09:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苯丙氨酸-PAL

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by rainboy3529 at 2016-09-08 08:06:14
重新优化下引物

请问你的意思是重新设计引物还是做个引物浓度梯度？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
16楼2016-09-09 09:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

魔鬼的天使

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:45:27
太感谢了！最近又跑了一张图，有条带，但弥散依然很严重！
...

试试优化引物浓度吧，我觉得引物应该没问题
赞一下 回复此楼
17楼2016-09-09 17:14:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainboy3529

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:49:40
请问你的意思是重新设计引物还是做个引物浓度梯度？
...

先试下引物浓度，不行的话，就要重新设计一下
赞一下 回复此楼
18楼2016-09-09 23:18:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sunshineboy

银虫 (小有名气)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
13楼: Originally posted by 苯丙氨酸-PAL at 2016-09-09 09:45:48

这是怎么调整后跑出来的图片啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2017-02-14 16:34:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)
★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
引物特异性不够，典型问题

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
20楼2017-02-15 10:07:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dsctg2楼
2016-09-07 17:04   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
tangbohejin3楼
2016-09-07 17:09   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
syhorchid6楼
2016-09-07 18:19   回复  
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 苯丙氨酸-PAL 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 07:59 by gy1nBQXYQJqL
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 07:55 by popo0625
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 07:32 by winsaint
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 05:45 by gy1nBQXYQJqL
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭