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跑pcr出现拖带是怎么回事
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如题，以前从没出现过这种情况，这是梯度pcr，这样说明是不是也有条带？ 发自小木虫IOS客户端 |
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4楼2016-09-07 17:38:35
5楼2016-09-07 17:41:00
★ ★
苯丙氨酸-PAL(金币+1): 谢谢参与
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:35
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:30:35
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有引物二聚体，引物活性可以。单独点一个模板，看是不是DNA模板降解 发自小木虫IOS客户端 |
7楼2016-09-07 18:23:00
8楼2016-09-08 02:10:13
9楼2016-09-08 08:06:14
10楼2016-09-08 08:47:32
★ ★ ★ ★ ★ ★
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xn8008: 金币+5, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-09-10 06:31:01
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不知道在哪看到的，觉得不错就备份了一下。你看看，可能会帮助到你。好像是位虫友总结的，可惜找不到原帖了 3. 扩增产物在凝胶中涂布或成片状条带弥散 （1）酶量过高。减少酶量；酶的质量差，调换另一来源的酶。 （2）dNTP浓度过高。减少dNTP的浓度。 （3）MgCl2浓度过高。可适当降低其用量。 （4）模板量过多。质粒DNA的用量应<50ng，而基因组DNA则应<200ng。 （5）引物浓度不够优化。对引物进行梯度稀释重复PCR反应。 （6）循环次数过多；增加模板量减少循环次数至30，缩短退火时间及延伸时间，或改用二种温度的PCR循环。 （7）退火温度过低。 （8）电泳体系有问题： ①凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大； ②凝胶没有凝固好； ③琼脂糖质量差。 （9）若为PCR试剂盒则可能： ①由于运输储存不当引起试剂盒失效； ②试剂盒本身质量有问题，如引物选择、循环参数等选择不当。 （10）降解的陈旧模板扩增也易产生涂布。 |
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苯丙氨酸-PAL11楼2016-09-08 16:31:22
12楼2016-09-09 09:45:27
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19楼2017-02-14 16:34:31
20楼2017-02-15 10:07:56
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dsctg2楼
2016-09-07 17:04
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2016-09-07 17:09
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2016-09-07 18:19
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