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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化实验一直不成功 找不到原因
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firefly22

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
十四_14: 金币+5, ★有帮助 2016-09-12 10:24:29
本帖内容被屏蔽
31楼2016-09-09 16:45:06
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Einsam_

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
十四_14: 金币+5, ★有帮助, 现在看来是感受态的问题 2016-09-12 10:24:58
你的质粒是低拷贝的嘛？转低拷贝质粒菌落会很难长出来。如果确定感受态细胞没问题，适当延长一下预摇的时间和菌板孵育的时间。
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32楼2016-09-09 17:06:50
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010308Jing

木虫 (正式写手)
是不是对BL21有毒性啊？

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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

十四_14
33楼2016-09-09 21:48:48
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514278815

木虫 (小有名气)
首先，验证你构建的质粒有没有问题，可以做个pcr。如果质粒没问题就考虑感受态和抗性问题，一般用枪头沾一下质粒转化就能张几百个克隆没问题，感受态一般不会出现太大问题，你考虑你是不是抗性搞错了。

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34楼2016-09-10 12:58:47
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疯狂的菜鸟

木虫 (小有名气)
1、抗性确定有没有用错，不要把其它的抗性板拿来用；2、bl21有不同的系列，要区别于bl21（de3），不同的菌株对目的基因表达产物（比如蛋白）的耐受性不同，可以理解为楼上说的“毒性”；3、复苏的时候有沉淀，你可以拿一管未进行过任何操作的同批次感受态复苏对比看看，确定是不是这批感受态的问题。祝好！

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35楼2016-09-11 16:54:01
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
十四_14: 金币+2, ★有帮助, 那么问题后来解决了吗？ 2016-09-13 08:48:47
引用回帖:
6楼: Originally posted by 十四_14 at 2016-09-08 08:33:07
涂板菌液的量也做了不同的  20微升，50微升，100微升，500微升，哪个都没长…………我还拿空载做了对照  也没长  但是同时做的空载转DH5α的对照长了菌  难道我的感受态有问题？？可都是新买的...

这个不一定是感受太的问题，我师妹做的时候用了自己做的，买的，别人实验室的都用了，dh5a都长的糊了板了，bl21的却始终没长，也在郁闷中

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···
36楼2016-09-11 23:47:52
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考研行者

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
37楼2016-09-12 01:01:19
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
33楼: Originally posted by 010308Jing at 2016-09-09 21:48:48
是不是对BL21有毒性啊？

也考虑过  还买了那种用于毒性蛋白表达的感受态  但是不行
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38楼2016-09-12 10:52:42
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
34楼: Originally posted by 514278815 at 2016-09-10 12:58:47
首先，验证你构建的质粒有没有问题，可以做个pcr。如果质粒没问题就考虑感受态和抗性问题，一般用枪头沾一下质粒转化就能张几百个克隆没问题，感受态一般不会出现太大问题，你考虑你是不是抗性搞错了。
...

请问转化时的质粒用量有吗，有没有一个标准？
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39楼2016-09-13 08:49:31
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514278815

木虫 (小有名气)
稍微弄点质粒就行

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40楼2016-09-13 19:13:47
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