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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化实验一直不成功 找不到原因
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十四_14

荣誉版主 (正式写手)
引用回帖:
19楼: Originally posted by tayifeita at 2016-09-08 14:59:22
如果你摇菌用的培养基和涂板子用的培养基不同可以清洗一下，相同的话倒是无所谓。...

这样啊~~
谢谢你！！
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21楼2016-09-08 16:20:47
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renren2004a

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 十四_14 at 2016-09-08 08:33:07
涂板菌液的量也做了不同的  20微升，50微升，100微升，500微升，哪个都没长…………我还拿空载做了对照  也没长  但是同时做的空载转DH5α的对照长了菌  难道我的感受态有问题？？可都是新买的...

将感受态涂布不加抗生素的平板看看有没有生长。
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22楼2016-09-08 17:18:10
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wacx33

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
23楼2016-09-08 22:44:44
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cm14704019

至尊木虫 (知名作家)
我估计感受态有问题，你可以做个对照看看

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24楼2016-09-08 23:55:08
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warkan

金虫 (正式写手)
没连上吧

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25楼2016-09-08 23:57:23
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Wawa521

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
26楼2016-09-09 01:02:29
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armigera

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-09-09 22:34:05
首先，你确定DH5alpha中提取的质粒没问题，这说明你前面的克隆做对了，不用考虑连接或者是载体的问题。其次，BL21表达感受态不能被转化，但对照组的DH5alpha没问题，说明是BL21出了问题。那么问题找到了。如果你确定这个是BL21或者你能弄到BL21的话，可以自己做感受态，步骤和制作DH5alpha一样，都是很传统的分子实验。如果弄不到菌株，你可以跟老板说，你的表达片段里有很多稀有氨基酸，BL21不能满足需要，需要更换其他菌株，能说通的话这事就成了。祝好运！

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27楼2016-09-09 01:58:15
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己做吧，公司做的感受态不一定比你做的好，很简单的~摇菌、冰浴、收菌、加CaCl2、收菌、重悬、分装，你也可以拿去卖
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
28楼2016-09-09 08:56:49
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小李1314

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 十四_14 at 2016-09-08 08:36:30
BL21感受态都是新买的  

昨天又做了一次  依旧没有长菌落  但是转空载的DH5α长了  而空载转BL21没长  是不是说明我的感受态是有问题的？？...

应该是没有问题吧
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29楼2016-09-09 09:49:26
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更恋秋风

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 十四_14 at 2016-09-08 10:20:38
怎是太坑了  新买的就有问题……

我这是小公司  提出再买新的领导估计不乐意了  抠的要死……

如果想要自己制备  请问如何制备呢？谢谢你~~~...

就是普通制作感受态的方法。一般做化转感受态就够了

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30楼2016-09-09 15:49:00
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