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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于PCR 已有2人参与

本人近期在做半定量PCR
同样的一批cDNA,之前P得都挺好,最近突然P不出来了。
引物没有换,模板没有换,PCR程序没有变。只是之前的引物用完了所以重新合成了一批。
Actin内参P出来都是没有问题的。
求助各位大神,这会是哪个方面的原因呢??
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谋事在人,成事在天
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xrxleisure

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
照这样说只能是引物的问题了
2楼2016-09-07 09:12:12
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普通回帖

RNA世界

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xrxleisure at 2016-09-07 09:12:12
照这样说只能是引物的问题了

但是阳性对照是可以P出来的啊?
谋事在人,成事在天
3楼2016-09-07 10:20:52
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295249857

新虫 (初入文坛)

一个体系里 就加了模板,引物,酶,dNTP,从你说的内参可以P出来,我觉得酶和dNTP应该是没问题的,可能是引物合成出问题了,或者你的模板降解了,内参可能比目的基因扩的片段短,所以能P出来
4楼2016-09-07 15:53:44
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534720018

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
核一下,看模板降解了没

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-09-07 18:25:46
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

能否说明下你这里的阳性对照是怎么做的啊?
坚持到底就是胜利!
6楼2016-09-08 10:44:11
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 295249857 at 2016-09-07 15:53:44
一个体系里 就加了模板,引物,酶,dNTP,从你说的内参可以P出来,我觉得酶和dNTP应该是没问题的,可能是引物合成出问题了,或者你的模板降解了,内参可能比目的基因扩的片段短,所以能P出来

谢谢!我去把内参的引物设计的长一些
谋事在人,成事在天
7楼2016-09-08 11:13:53
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-08 10:44:11
能否说明下你这里的阳性对照是怎么做的啊?

阳性对照就是用之前P出来的cDNA做的啊
谋事在人,成事在天
8楼2016-09-08 11:15:22
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RNA世界

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 534720018 at 2016-09-07 18:25:46
核一下,看模板降解了没

请问这个该如何看呢?
RNA跑胶吗?
谋事在人,成事在天
9楼2016-09-08 11:16:39
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534720018

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by RNA世界 at 2016-09-08 11:16:39
请问这个该如何看呢?
RNA跑胶吗?...

模板直接跑胶

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-09-08 15:07:06
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