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长片段PCR问题 已有4人参与
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要从斑马鱼基因组DNA上扩增一个大约6K左右的片段 尝试了实验室所有的酶，Taq，KOD，KODneo……但是直接扩增均失败 有了一个新的思路，把6K分成3个2K 的片段，用Overlap PCR最后连接在一起，但是小片段扩增成功，测序也是正确的，没有办法用Overlap PCR的方式融合在一起，不知道是出了啥状况，大家都有啥好的建议。 或者说有没有相关从基因组上扩增长片段的经验，好用的酶或者Kit之类的，感激不尽，祝大家科研天天出成果@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw |
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zhangyunjing
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16楼2016-09-07 14:15:10
010308Jing
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3楼2016-09-05 19:01:17
更恋秋风
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-05 22:36:43
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-09-05 22:36:43
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6k应该是可以pcr的，如果是直接pcr可以尝试第一步的预变形时间延长到15min，酶可以试试NEB的Q5聚合酶。如果是直接分段pcr然后overlap pcr，实际上是不太容易连接的，可以试试其他连接手段，比如一步克隆。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-09-05 19:08:40
5楼2016-09-05 19:47:42