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1083123347银虫 (初入文坛)
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连接、转化后不长菌，求支招
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载体骨架是通过pcr扩增得到的，然后进行双酶切（hind III 和kpnI）,酶切回收后约50ng/ul（长是3800bp） 目标片段是在T载体上，也进行双酶切（hind III 和kpnI），切胶回收是160ng/ul(长是2300bp) 用的是fermentas的T4连接酶，22℃连接1h 连接体系如下： 载体骨架 2ul 插入片段 1ul 水 14.5ul T4 buffer 2 T4酶 0.5ul ----------------------------- total 20ul 做转化后一个菌液没有长，做了四次了，载体和插入片段连接比例试过1:3,1:5,1:7，都没有菌落长出，求大神支招，还是我可能哪方面除了问题  |
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2楼2017-01-11 17:19:54
1083123347
银虫 (初入文坛)
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- 专业: 化学生物学与生物有机化学
3楼2017-01-18 10:40:16
50