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lzhwin木虫 (正式写手)
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求助:western转膜的问题
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这两天在做western,连续转了3次膜立春红S染色,结果什么都没有,太让人伤心了。 具体细节: 植物叶片总蛋白提取,目的蛋白约70KD 浓缩胶5% 分离胶8%。上样跑两块胶其中一块做了考马斯亮蓝染色有明显条带。 PVDF膜先用甲醇处理约5秒,然后放入转膜缓冲液(甘氨酸、Tris、甲醇)中浸泡,叠放顺序均润湿过,黑板、海绵、两张滤纸、凝胶、膜、PVDF膜、两张滤纸、海绵、白板。biorad湿转,插入是黑板对应黑板,200mA恒流1小时,取出立春红S染色5分钟,整个膜变成红色,什么条带都没有。 PVDF膜是不是有反正面啊?感觉一面亲水一面疏水啊。 肯定是关键步骤出了问题,否则不可能一点条带都没有。大家帮帮忙吧! |
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