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lzhwin木虫 (正式写手)
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求助：western转膜的问题
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这两天在做western，连续转了3次膜立春红S染色，结果什么都没有，太让人伤心了。 具体细节： 植物叶片总蛋白提取，目的蛋白约70KD 浓缩胶5% 分离胶8%。上样跑两块胶其中一块做了考马斯亮蓝染色有明显条带。 PVDF膜先用甲醇处理约5秒，然后放入转膜缓冲液（甘氨酸、Tris、甲醇）中浸泡，叠放顺序均润湿过，黑板、海绵、两张滤纸、凝胶、膜、PVDF膜、两张滤纸、海绵、白板。biorad湿转，插入是黑板对应黑板，200mA恒流1小时，取出立春红S染色5分钟，整个膜变成红色，什么条带都没有。 PVDF膜是不是有反正面啊？感觉一面亲水一面疏水啊。 肯定是关键步骤出了问题，否则不可能一点条带都没有。大家帮帮忙吧！ |
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6楼2008-11-24 14:05:46