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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 胶回收的问题
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619150609

新虫 (初入文坛)

[求助] 胶回收的问题 已有3人参与

我胶回收时只有一条带，但是回收后跑电泳又出现了两条带，但是离得很近，这是什么原因！！是不是跑电泳没跑开就切胶，还是怎样！！能不能通过调整胶的浓度来进一步区分条带，我用的是1％。想要进一步区分条带是增加浓度还是降低浓度！！希望各位大神回复！！谢谢

@biostar2009 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-08-26 23:00:19
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-08-27 06:25:33
我也遇到过这种情况。我是通过减少上样量来解决的。改变胶的浓度，没有试过。
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2楼2016-08-27 00:13:53
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Freda_0829

新虫 (初入文坛)
胶的浓度要看条带的大小，条带很长就要用低浓度胶，条带较短，胶的浓度就要相对高一些。1.0的分离范围是250bp~12kb,0.8是500bp~15kb。我觉得可以低电压跑得时间长一点，但是注意不要把条带跑出去了。

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3楼2016-08-27 08:34:40
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619150609

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-08-27 00:13:53
我也遇到过这种情况。我是通过减少上样量来解决的。改变胶的浓度，没有试过。

是减少回收前的上样量吗

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4楼2016-08-28 09:26:40
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619150609

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Freda_0829 at 2016-08-27 08:34:40
胶的浓度要看条带的大小，条带很长就要用低浓度胶，条带较短，胶的浓度就要相对高一些。1.0的分离范围是250bp~12kb,0.8是500bp~15kb。我觉得可以低电压跑得时间长一点，但是注意不要把条带跑出去了。
...

谢谢

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5楼2016-08-28 09:28:27
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oylb

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2016-08-29 21:22:15
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Bioexperixgs

新虫 (正式写手)
胶厚了。

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7楼2016-08-30 08:48:58
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青春过期咯

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你切胶的时候看不出来是两条带 说明上样量很大 条带很宽掩盖了扎带的分界线 导致切胶切多了 减少上样量吧
再或者降低胶浓度 让条带分得开一点
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从前不回头，往后不将就
8楼2016-08-30 09:40:22
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菱格ing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

胶纯化是建议低电压（100V），然后跑的时间长一点，但是时间长BUFFER可能会分散，所以建议跑完了再染色，控制好时间。然后想要分离长度相近的片段要降低胶的浓度。
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9楼2016-08-30 10:00:13
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一直寂寞的鱼

木虫 (正式写手)
PCR扩增时把温度提高一点，重新尝试一下看看

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幸福永远
10楼2016-08-31 18:33:41
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