24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 934  |  回复: 11
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 wh7690703 的 4 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 如何扩增高GC含量的模板!

各位高手们注意了,我有个问题想请教大家!
本人之前一直在P富含GC的模板,使用了LA-Taq及其GC Buffer(本身含有DMSO和甘油)和slowdown PCR,都没有将其扩增出来。也重新设计了引物,仍然扩增不出。
我都不知道该怎么办了,哪位高手知道的话,帮忙啊
小弟不甚感激~
注:模板为链霉菌基因组
梯度和Touchdown PCR及热启动PCR都做过

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-8 at 12:41 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RecA

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
我一般用的体系是     TAKARA LA-Taq        5U/μl              0.5μl
     2xGC Buffer Ⅰ/Ⅱ   (5mM Mg2+)       25μl
     Genomic DNA                                 1μl
     dNTP Mixtures       (Takara 10mM)           2.5μl
     上游引物               (10μM)               2.5μl
     下游引物               (10μM)               2.5μl
     无菌水                                          11μl
     总体积                                          50μl


你看看模板,引物有没问题哦。

[ Last edited by RecA on 2008-11-19 at 00:51 ]
9楼2008-11-19 00:49:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
换酶~~
KOD FX Taq似乎说很牛X
不过没试过
价钱,还好啦
2楼2008-11-17 22:48:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wh7690703

木虫 (正式写手)

楼上的兄弟,除了换酶还有其他的好方法吗?
3楼2008-11-17 23:10:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

要不就只好自己调DMSO和Mg2+的浓度了
但是这是一个痛苦的过程
DMSO浓度太高太低都出不来,一般以1%为梯度慢慢摸
Mg2+太高太低也不行,以0.5mM为梯度摸
4楼2008-11-17 23:17:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +7 87639 2026-03-21 12/600 2026-03-26 22:08 by 不吃魚的貓
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 07化学280分求调剂 +8 722865 2026-03-23 8/400 2026-03-26 20:00 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 315分,诚求调剂,材料与化工085600 +3 13756423260 2026-03-22 3/150 2026-03-22 20:11 by edmund7
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见