| 查看: 933 | 回复: 11 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 wh7690703 的 4 个金币 | |||
wh7690703木虫 (正式写手)
|
[交流]
如何扩增高GC含量的模板！
|
||
|
各位高手们注意了，我有个问题想请教大家！ 本人之前一直在P富含GC的模板，使用了LA-Taq及其GC Buffer（本身含有DMSO和甘油）和slowdown PCR，都没有将其扩增出来。也重新设计了引物，仍然扩增不出。 我都不知道该怎么办了，哪位高手知道的话，帮忙啊 小弟不甚感激~ 注：模板为链霉菌基因组 梯度和Touchdown PCR及热启动PCR都做过 [ Last edited by 350784478 on 2009-11-8 at 12:41 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
一志愿武汉理工，总分321，英一数二，求老师收留。
已经有5人回复
-
324求调剂
已经有8人回复
-
284求调剂
已经有12人回复
-
348求调剂
已经有3人回复
-
329求调剂
已经有7人回复
-
求调剂，一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕
已经有4人回复
-
考研调剂
已经有9人回复
-
304材料求调剂
已经有4人回复
-
一志愿郑大085600，310分求调剂
已经有3人回复
-
317求调剂
已经有7人回复
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
2楼2008-11-17 22:48:46
wh7690703
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 6312.4
- 散金: 295
- 红花: 2
- 帖子: 512
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 565722
- 注册: 2008-05-29
- 专业: 食品加工技术
3楼2008-11-17 23:10:07
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
4楼2008-11-17 23:17:39
wh7690703
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 6312.4
- 散金: 295
- 红花: 2
- 帖子: 512
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 565722
- 注册: 2008-05-29
- 专业: 食品加工技术
|
GC Buffer有两种，一个DMSO含量高，一个低些 所以调整GC Buffer不太可能 Mg2+浓度又怎么调啊，它可是跟在GC Buffer里的(Mg2+浓度为5mM) 50ul体系加入GC Buffer体积为25ul，也就是说Mg2+浓度为2.5mM。dNTP(2.5mM)加入8ul，即浓度为0.4mM。 PCR反应体系( 50μl)： TAKARA LA-Taq 5U/μl 0.5μl 2xGC Buffer Ⅰ/Ⅱ (5mM Mg2+) 25μl Genomic DNA 1μl dNTP Mixtures (各2.5mM) 8μl 上游引物 (20μM) 1μl 下游引物 (20μM) 1μl 无菌水 12.5μl 总体积 50μl 不知这样的体系合适不？ |
5楼2008-11-17 23:47:06
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
6楼2008-11-18 00:09:32
三磷酸腺苷
铁杆木虫 (职业作家)
- BioEPI: 3
- 应助: 1 (幼儿园)
- 贵宾: 0.021
- 金币: 7298.5
- 散金: 9
- 红花: 13
- 帖子: 4032
- 在线: 224.7小时
- 虫号: 551611
- 注册: 2008-04-27
- 性别: GG
- 专业: 神经系统肿瘤（含特殊感受
7楼2008-11-18 12:22:08
。你看看引物 buffer有没问题。 8楼2008-11-19 00:46:55
9楼2008-11-19 00:49:51
10楼2008-11-19 16:39:33
