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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wh7690703

木虫 (正式写手)

[交流] 如何扩增高GC含量的模板!

各位高手们注意了,我有个问题想请教大家!
本人之前一直在P富含GC的模板,使用了LA-Taq及其GC Buffer(本身含有DMSO和甘油)和slowdown PCR,都没有将其扩增出来。也重新设计了引物,仍然扩增不出。
我都不知道该怎么办了,哪位高手知道的话,帮忙啊
小弟不甚感激~
注:模板为链霉菌基因组
梯度和Touchdown PCR及热启动PCR都做过

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-8 at 12:41 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


wh7690703(金币+1,VIP+0):xiexie
很难讲
其实,难扩的模板,我用takara的酶就是扩不出来…………
我换了酶就一直很稳定,还没遇到扩不出来的……
我用的是Invitrogen的白金高保真的Taq
还有promega的GoTaq
你的模板GC%有多大?
6楼2008-11-18 00:09:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
reasonspare(金币+3,VIP+0):积极交流奖
换酶~~
KOD FX Taq似乎说很牛X
不过没试过
价钱,还好啦
2楼2008-11-17 22:48:46
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wh7690703

木虫 (正式写手)

楼上的兄弟,除了换酶还有其他的好方法吗?
3楼2008-11-17 23:10:07
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

要不就只好自己调DMSO和Mg2+的浓度了
但是这是一个痛苦的过程
DMSO浓度太高太低都出不来,一般以1%为梯度慢慢摸
Mg2+太高太低也不行,以0.5mM为梯度摸
4楼2008-11-17 23:17:39
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