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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体去磷酸化后为什么不能自连但能和目的片段相连？
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Q不Q

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体去磷酸化后为什么不能自连但能和目的片段相连？ 已有1人参与

在网上搜原理时候是这样说的
5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的，用碱性磷酸酶处理切开的载体后，载体不能在DNA连接酶的作用下自连，而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的，可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。
所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。
但是我想问目的片段的两条链中只有一条链可以与载体的一条链相连？如何让载体5'端去磷酸化的这条链一条链也连接起来？
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1楼 2016-08-21 16:58:19
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蔡小蕾99

新虫 (小有名气)
求问你们用之前会把他分装吗？有没有具体的浓度和溶解液？

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2楼2017-07-20 16:45:16
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xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如你所说，连接不能发生在载体5'端和片段3'端对接处，但是不妨碍载体3'端和片段5'端处的对接。

这样的结果是每条产物链都有一个缺口，都是线性的而非环状。但是互补的两条链中缺口位置是互相错开的，任然有较长序列是互补配对。

这样的两条线性链任然可以形成一个环状产物，只是有两个单边缺口而已。

这种有缺口的环状产物在转化进入细胞后有几率被细胞修复而成为完整的质粒进而被正常复制。
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3楼2017-07-21 10:06:46
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