应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体去磷酸化后为什么不能自连但能和目的片段相连？
51/1返回列表
查看: 3900  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Q不Q

新虫 (初入文坛)

[求助] 载体去磷酸化后为什么不能自连但能和目的片段相连？ 已有1人参与

在网上搜原理时候是这样说的
5'端的磷酸基团对于DNA连接是必须的，用碱性磷酸酶处理切开的载体后，载体不能在DNA连接酶的作用下自连，而目的基因片段两端是有5'端的磷酸基团的，可以在DNA连接酶的作用下与载体连接。
所以碱性磷酸酶处理可以防止质粒载体DNA自连的作用。
但是我想问目的片段的两条链中只有一条链可以与载体的一条链相连？如何让载体5'端去磷酸化的这条链一条链也连接起来？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-08-21 16:58:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuweitao

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如你所说，连接不能发生在载体5'端和片段3'端对接处，但是不妨碍载体3'端和片段5'端处的对接。

这样的结果是每条产物链都有一个缺口，都是线性的而非环状。但是互补的两条链中缺口位置是互相错开的，任然有较长序列是互补配对。

这样的两条线性链任然可以形成一个环状产物，只是有两个单边缺口而已。

这种有缺口的环状产物在转化进入细胞后有几率被细胞修复而成为完整的质粒进而被正常复制。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2017-07-21 10:06:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

蔡小蕾99

新虫 (小有名气)
求问你们用之前会把他分装吗？有没有具体的浓度和溶解液？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-07-20 16:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕318求调剂 +7 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-01 16:25 by veteran-FG
[考研] 材料化工调剂 +9 今夏不夏 2026-03-01 10/500 2026-03-01 16:01 by hmn_wj
[考研] 295求调剂 +6 19171856320 2026-02-28 6/300 2026-03-01 15:52 by jxstnuZYX
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭