| 查看: 2361 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
feixieliuli铜虫 (小有名气)
|
[求助]
关于原核表达包涵体纯化复性的问题 已有2人参与
|
|
|
大肠杆菌表达的带His标签的蛋白，上清和包涵体均有。 上清放置2天左右，目的蛋白沉淀很严重，若破菌之后马上纯化，在500mM咪唑洗脱时目的蛋白沉淀很严重，加入0.2%SLS，沉淀消失。 包涵体是用4M尿素过夜溶解的，溶解的很充分，上镍柱纯化时，在100mM咪唑洗脱时严重沉淀（沉淀为目的蛋白），加0.2%SLS沉淀不溶解。500mM咪唑洗脱（洗脱下来目的蛋白浓度很高）时沉淀严重，加入0.2%SLS之后，加速沉淀，用不含咪唑的A液（4M尿素，20mM Tris，0.15M NaCl）稀释洗脱液，也会加速目的蛋白沉淀，但是用B液（4M尿素，20mM Tris，0.15M NaCl，500mM 咪唑）稀释沉淀消失。沉淀消失之后加0.2%SLS则不会引起沉淀。 复性时，直接把500mM咪唑纯化样品（含4M尿素）透析到复性液（0M尿素），透析袋刚放入复性液，透析袋中马上出现沉淀，将蛋白离心之后继续复性，然后就不会沉淀，复性好之后的样品得率很低，但是Elisa结果很好。 复性前样品含有0.2%SLS效果较差。 求大神分析一下这种原因及解决办法。 PS:8M尿素溶解样品复性之后效果很差。 |
回复此楼» 猜你喜欢
材料求调剂一志愿哈工大324
已经有5人回复
-
一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分
已经有5人回复
-
0856材料化工调剂 总分330
已经有9人回复
-
085602 化工专硕 338分 求调剂
已经有9人回复
-
352分 化工与材料
已经有4人回复
-
求调剂
已经有8人回复
-
材料求调剂 一志愿哈工大总分298分，前三科223分
已经有3人回复
-
085600 286分 材料求调剂
已经有4人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
275求调剂
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于E-tag标记蛋白的纯化问题！~求助，谢谢帮忙~！
已经有9人回复
feixieliuli
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 128.4
- 散金: 53
- 红花: 1
- 帖子: 192
- 在线: 95.2小时
- 虫号: 2080381
- 注册: 2012-10-23
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
4楼2016-08-10 14:13:37
feixieliuli
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 128.4
- 散金: 53
- 红花: 1
- 帖子: 192
- 在线: 95.2小时
- 虫号: 2080381
- 注册: 2012-10-23
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
2楼2016-08-10 13:42:52
3楼2016-08-10 14:05:45
feixieliuli
铜虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 128.4
- 散金: 53
- 红花: 1
- 帖子: 192
- 在线: 95.2小时
- 虫号: 2080381
- 注册: 2012-10-23
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
5楼2016-08-10 14:17:00
