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feixieliuli铜虫 (小有名气)
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关于原核表达包涵体纯化复性的问题 已有2人参与
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大肠杆菌表达的带His标签的蛋白，上清和包涵体均有。 上清放置2天左右，目的蛋白沉淀很严重，若破菌之后马上纯化，在500mM咪唑洗脱时目的蛋白沉淀很严重，加入0.2%SLS，沉淀消失。 包涵体是用4M尿素过夜溶解的，溶解的很充分，上镍柱纯化时，在100mM咪唑洗脱时严重沉淀（沉淀为目的蛋白），加0.2%SLS沉淀不溶解。500mM咪唑洗脱（洗脱下来目的蛋白浓度很高）时沉淀严重，加入0.2%SLS之后，加速沉淀，用不含咪唑的A液（4M尿素，20mM Tris，0.15M NaCl）稀释洗脱液，也会加速目的蛋白沉淀，但是用B液（4M尿素，20mM Tris，0.15M NaCl，500mM 咪唑）稀释沉淀消失。沉淀消失之后加0.2%SLS则不会引起沉淀。 复性时，直接把500mM咪唑纯化样品（含4M尿素）透析到复性液（0M尿素），透析袋刚放入复性液，透析袋中马上出现沉淀，将蛋白离心之后继续复性，然后就不会沉淀，复性好之后的样品得率很低，但是Elisa结果很好。 复性前样品含有0.2%SLS效果较差。 求大神分析一下这种原因及解决办法。 PS:8M尿素溶解样品复性之后效果很差。 |
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3楼2016-08-10 14:05:45
feixieliuli
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4楼2016-08-10 14:13:37
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