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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR 已有3人参与

刚开始做定量PCR，用的SYBR染料法，阴性对照（只加水）总是有扩增，Ct值都在35以下。之后换实验室、换水、换枪，引物重新合成，试剂也是新开的，但是还是存在阴性扩增，电泳检测，NTC条带和目的基因的一致。现在用UDG试剂做的，问题仍然无法解决，实在想不通是什么原因？实验室有个老师半个月就把定量做完了，我这都做了2个月了。求大神赐教啊！！！
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1楼 2016-08-07 17:21:20
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vanchy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议吧把NTC的扩增片段连接到T质粒中送测序，看一下到底扩增出来的是什么片段。如果是目的片段，则你的环境或试剂还是有污染。
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6楼2016-08-08 09:07:44
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)
帮忙顶一下

发自小木虫Android客户端
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2楼2016-08-07 18:14:26
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-07 22:13:31
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-08 08:30:18
我觉得是引物的原因，试过重新设计引物吗？
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3楼2016-08-07 18:58:29
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zhangxf2014

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by stone2239 at 2016-08-07 18:58:29
我觉得是引物的原因，试过重新设计引物吗？

试过，但是效果不好，有双峰。也重新合成过，但是NTC还是存在。。。
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4楼2016-08-07 19:01:17
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