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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助大神帮忙看看，pcr后出现两条带。
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814257155

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神帮忙看看，pcr后出现两条带。 已有3人参与

marker在边上很清楚，其中上面那条是要求的目的条带，下面那个特别短的是什么呢？目的条带在140kb左右，做了好几次了，下面都有这个特别短的条带，自己找不出什么原因，很苦恼，恳求各位大神给点意见，或者说这个就是pcr没成功，给点注意事项，我再试试。

求助大神帮忙看看，pcr后出现两条带。
IMG_1292.JPG@biostar2009@youlinglyw@飞约疯人院@wizardfan
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1楼 2016-07-31 21:19:01
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岳大白

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 814257155 at 2016-08-01 06:30:50
第二条带在marker上看在100以下。有回复说是引物二聚体，这个该如何避免呢？
...

适当提高退火温度，或者换引物。但这个并不影响你切胶回收吧

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5楼2016-08-01 08:47:24
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damaoouba

木虫 (正式写手)
不需要纠结这是什么啦，不影响你后续做的。应该是杂带或者引物而具体吧，我更倾向于这是杂带。一般是因为引物特异性不够导致的。

后续做的话，把目的条带切胶回收。用回收产物做底物，重新PCR，就行了。
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17楼2016-08-05 09:31:31
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普通回帖

小冀-

版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-01 07:26:08
目的条带140kb?那第二条带不可能太短啊~

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···
2楼2016-07-31 21:45:47
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664751146

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-01 07:26:19
引物二聚体

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3楼2016-07-31 23:42:02
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814257155

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-01 07:26:28
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小冀- at 2016-07-31 21:45:47
目的条带140kb?那第二条带不可能太短啊~

第二条带在marker上看在100以下。有回复说是引物二聚体，这个该如何避免呢？

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4楼2016-08-01 06:30:50
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tjabhm


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6楼2016-08-01 09:43:14
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
814257155: 金币+20, ★★★很有帮助 2016-08-04 10:43:09
引用回帖:
4楼: Originally posted by 814257155 at 2016-08-01 06:30:50
第二条带在marker上看在100以下。有回复说是引物二聚体，这个该如何避免呢？
...

说实话，引物二具体好像是避免不了的~你跑得图里边它和目的条带分得挺开的了，不影响你后续实验的
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···
7楼2016-08-01 10:53:52
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814257155

新虫 (初入文坛)
切胶回收后是不是还得再pcr扩增下，要不量太少，下步酶切效果不理想吧？

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8楼2016-08-01 11:37:04
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814257155

新虫 (初入文坛)
先谢谢各位了，我第一次做，没什么经验。

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9楼2016-08-01 11:40:17
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atcgsomeone

铁虫 (小有名气)
少加点引物试试

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要么干，要么滚
10楼2016-08-01 13:54:43
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