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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 细菌DNA已经提取出来了，用通用引物和特异引物扩增，总是不出条带，只有二聚体。
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静默人声412

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌DNA已经提取出来了，用通用引物和特异引物扩增，总是不出条带，只有二聚体。 已有3人参与

求助！细菌DNA已经提取出来了，用通用引物和特异引物扩增，总是不出条带，只有二聚体。各位大神可以分析一下原因吗？
还有我分离出一种氨氧化细菌总是提不出DNA,试了三种试剂盒。

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1楼 2016-07-26 19:02:44
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
2楼2016-07-30 14:17:29
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
提完DNA后跑胶，顺便测一下浓度和纯度

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3楼2016-07-30 20:59:50
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ChengZQ

新虫 (职业作家)
PCR扩增不出来，有可能是模板浓度高了，浓度一般控制在10-50ng/ul，要嘛就是引物浓度高了，适当稀释十倍看一下。。

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4楼2016-07-30 21:01:45
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岳大白

新虫 (初入文坛)
以前我也出现过这种情况，你试试提基因组的时候多加点RNA酶

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5楼2016-07-30 22:07:15
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1501993727

金虫 (小有名气)
体系做的有问题，或者DNA有问题

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6楼2016-07-30 22:09:48
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2282954162

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果一点条带都没有，说明不是引物浓度过量的问题，一般问题出在DNA的提取上，，您可以多提取的DNA做一个跑胶，和浓度的测定！确定后，再考虑引物问题。
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心若没有栖息的地方，到哪里都是在流浪！
7楼2016-07-31 13:12:54
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静默人声412

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2016-07-30 14:17:29
看情况你得先确定是提出来了啊

直接用提的DNA跑胶，有条带

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8楼2016-07-31 15:47:47
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静默人声412

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 2282954162 at 2016-07-31 13:12:54
如果一点条带都没有，说明不是引物浓度过量的问题，一般问题出在DNA的提取上，，您可以多提取的DNA做一个跑胶，和浓度的测定！确定后，再考虑引物问题。

其他细菌DNA提的出DNA,鉴定出的氨氧化细菌，直接用提的DNA跑不出条带。
用革兰氏染液染色，颜色反应也正确。
细菌DNA已经提取出来了，用通用引物和特异引物扩增，总是不出条带，只有二聚体。



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9楼2016-07-31 15:51:40
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豪子的55

新虫 (初入文坛)
同学，你这个是怎么鉴定氨氧化微生物的？
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10楼2017-07-26 11:03:13
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