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静默人声412

木虫 (小有名气)

[求助] 细菌DNA已经提取出来了,用通用引物和特异引物扩增,总是不出条带,只有二聚体。 已有3人参与

求助!细菌DNA已经提取出来了,用通用引物和特异引物扩增,总是不出条带,只有二聚体。各位大神可以分析一下原因吗?
还有我分离出一种氨氧化细菌总是提不出DNA,试了三种试剂盒。

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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

2楼2016-07-30 14:17:29
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ChengZQ

新虫 (职业作家)

提完DNA后跑胶,顺便测一下浓度和纯度

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3楼2016-07-30 20:59:50
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ChengZQ

新虫 (职业作家)

PCR扩增不出来,有可能是模板浓度高了,浓度一般控制在10-50ng/ul,要嘛就是引物浓度高了,适当稀释十倍看一下。。

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4楼2016-07-30 21:01:45
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岳大白

新虫 (初入文坛)

以前我也出现过这种情况,你试试提基因组的时候多加点RNA酶

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5楼2016-07-30 22:07:15
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1501993727

金虫 (小有名气)

体系做的有问题,或者DNA有问题

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6楼2016-07-30 22:09:48
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2282954162

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

如果一点条带都没有,说明不是引物浓度过量的问题,一般问题出在DNA的提取上,,您可以多提取的DNA做一个跑胶,和浓度的测定!确定后,再考虑引物问题。
心若没有栖息的地方,到哪里都是在流浪!
7楼2016-07-31 13:12:54
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静默人声412

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Eternity宇 at 2016-07-30 14:17:29
看情况你得先确定是提出来了啊

直接用提的DNA跑胶,有条带

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8楼2016-07-31 15:47:47
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静默人声412

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 2282954162 at 2016-07-31 13:12:54
如果一点条带都没有,说明不是引物浓度过量的问题,一般问题出在DNA的提取上,,您可以多提取的DNA做一个跑胶,和浓度的测定!确定后,再考虑引物问题。

其他细菌DNA提的出DNA,鉴定出的氨氧化细菌,直接用提的DNA跑不出条带。
用革兰氏染液染色,颜色反应也正确。
细菌DNA已经提取出来了,用通用引物和特异引物扩增,总是不出条带,只有二聚体。



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9楼2016-07-31 15:51:40
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豪子的55

新虫 (初入文坛)

同学,你这个是怎么鉴定氨氧化微生物的?
10楼2017-07-26 11:03:13
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