应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酶切后的tag free蛋白挂在镍柱上
101/1返回列表
查看: 2150  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

孤の魔灵

银虫 (小有名气)

[求助] 酶切后的tag free蛋白挂在镍柱上 已有2人参与

目标蛋白大小5kDa，蛋白可溶性表达，融合Sumo Tag，纯化后用含有His Tag的Sumo蛋白酶酶切，标签被切开，之后用Ni-IDA回收。
条件：上样Buffer：50mM Tris，300mM NaCl，20mM 咪唑，pH8.0
洗脱：50mM 100mM 500mM 咪唑梯度洗脱
结果：流出中没有目标蛋白，50mM和100mM咪唑洗脱液中有目标蛋白，但是也同时存在Sumo Tag
求各位大神帮帮忙，怎样得到我的tag free蛋白
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-23 11:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孤の魔灵: 金币+5, ★有帮助 2016-08-03 16:00:17
酶切后，用亲和的分不开，可以尝试其他的比如离子交换，凝胶过滤等。祝顺利
赞一下 回复此楼
2楼2016-07-25 11:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

古月问你哦
发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-25 14:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
.
4楼2016-07-25 16:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
孤の魔灵: 金币+10, ★有帮助 2016-08-03 16:00:31
你的实验本来是想让酶切后的目的蛋白从镍柱流穿吗？结果却是酶切后的目的蛋白和Ni-IDA有较强的吸附作用，导致无法和切下来的sumo分开吗？如果确定你酶切后的目的蛋白不带His，可以试试用Ni-NTA进行分离。NTA比IDA的吸附作用较弱，非特异性吸附要少些。
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
5楼2016-07-26 21:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-26 21:43:18
你的实验本来是想让酶切后的目的蛋白从镍柱流穿吗？结果却是酶切后的目的蛋白和Ni-IDA有较强的吸附作用，导致无法和切下来的sumo分开吗？如果确定你酶切后的目的蛋白不带His，可以试试用Ni-NTA进行分离。NTA比IDA的 ...

提高盐浓度会有效果么？我现在吧盐浓度提高到1.5M，非特异性吸附会不会少些
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-27 09:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)
也可以试试看吧。理论上应该会有效果。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
7楼2016-07-27 10:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-27 10:13:00
也可以试试看吧。理论上应该会有效果。

哎。。。失败了，蛋白还是挂柱了
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-28 10:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 孤の魔灵 at 2016-07-28 10:57:42
哎。。。失败了，蛋白还是挂柱了...

那就换NTA试试吧。还是不行的话只能尝试离子交换或疏水了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
9楼2016-07-28 12:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-28 12:42:18
那就换NTA试试吧。还是不行的话只能尝试离子交换或疏水了。
...

没有NTA柱子。。。。。准备试试离子交换
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-29 11:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 孤の魔灵 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 14/700 2026-08-09 23:33 by Tide man
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +15 且听虎啸 2026-08-07 22/1100 2026-08-09 22:13 by 布布和一二
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭