应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酶切后的tag free蛋白挂在镍柱上
101/1返回列表
查看: 2242  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

孤の魔灵

银虫 (小有名气)

[求助] 酶切后的tag free蛋白挂在镍柱上 已有2人参与

目标蛋白大小5kDa，蛋白可溶性表达，融合Sumo Tag，纯化后用含有His Tag的Sumo蛋白酶酶切，标签被切开，之后用Ni-IDA回收。
条件：上样Buffer：50mM Tris，300mM NaCl，20mM 咪唑，pH8.0
洗脱：50mM 100mM 500mM 咪唑梯度洗脱
结果：流出中没有目标蛋白，50mM和100mM咪唑洗脱液中有目标蛋白，但是也同时存在Sumo Tag
求各位大神帮帮忙，怎样得到我的tag free蛋白
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-07-23 11:17:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
孤の魔灵: 金币+5, ★有帮助 2016-08-03 16:00:17
酶切后，用亲和的分不开，可以尝试其他的比如离子交换，凝胶过滤等。祝顺利
赞一下 回复此楼
2楼2016-07-25 11:25:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

古月问你哦
发自小木虫Android客户端
3楼2016-07-25 14:55:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
.
4楼2016-07-25 16:16:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
孤の魔灵: 金币+10, ★有帮助 2016-08-03 16:00:31
你的实验本来是想让酶切后的目的蛋白从镍柱流穿吗？结果却是酶切后的目的蛋白和Ni-IDA有较强的吸附作用，导致无法和切下来的sumo分开吗？如果确定你酶切后的目的蛋白不带His，可以试试用Ni-NTA进行分离。NTA比IDA的吸附作用较弱，非特异性吸附要少些。
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
5楼2016-07-26 21:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-26 21:43:18
你的实验本来是想让酶切后的目的蛋白从镍柱流穿吗？结果却是酶切后的目的蛋白和Ni-IDA有较强的吸附作用，导致无法和切下来的sumo分开吗？如果确定你酶切后的目的蛋白不带His，可以试试用Ni-NTA进行分离。NTA比IDA的 ...

提高盐浓度会有效果么？我现在吧盐浓度提高到1.5M，非特异性吸附会不会少些
赞一下 回复此楼
6楼2016-07-27 09:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)
也可以试试看吧。理论上应该会有效果。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
7楼2016-07-27 10:13:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-27 10:13:00
也可以试试看吧。理论上应该会有效果。

哎。。。失败了，蛋白还是挂柱了
赞一下 回复此楼
8楼2016-07-28 10:57:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keke226

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 孤の魔灵 at 2016-07-28 10:57:42
哎。。。失败了，蛋白还是挂柱了...

那就换NTA试试吧。还是不行的话只能尝试离子交换或疏水了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
读书廿年倦写字，如今翻书不识志，若知眷书悔前程，无如渔樵未识时。三年担柴熟山性，三年苦网谙水汹，前程在心自倦舒，识志何用书中清。
9楼2016-07-28 12:42:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤の魔灵

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by keke226 at 2016-07-28 12:42:18
那就换NTA试试吧。还是不行的话只能尝试离子交换或疏水了。
...

没有NTA柱子。。。。。准备试试离子交换
赞一下 回复此楼
10楼2016-07-29 11:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 孤の魔灵 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 07:28 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 05:44 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:33 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:26 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭