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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 利用胶回收试剂盒过滤柱增加DNA浓度
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pangadmire

铁虫 (小有名气)

[求助] 利用胶回收试剂盒过滤柱增加DNA浓度 已有3人参与

回收DNA时，溶解液加多了，但是有很多管，计划用再次过柱子的方法，把几管浓缩成一管，用过这种方法的请发言。

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1楼 2016-07-20 10:54:17
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安静de执着14

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:13
你是最后一步溶解DNA的时候溶解液加多了吗？我觉得你如果再次过柱子，得率应该也不高，因为离心的时候DNA会随溶解液一起被离到底部，这样吸附到柱子上的DNA会很少。建议可以用无水乙醇沉淀。

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3楼2016-07-20 17:45:27
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:20
pangadmire: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-07-23 00:31:25
1.加入两倍体积预冷无水乙醇，混匀后在-20度静置几小时，离心，弃上清，挥发干乙醇，重新用小体积水溶解。
2.真空冷冻干燥机。不同公司有很多，网上有很多，自己搜，不需要抽干，体积减小就行，你只是要提高浓度。
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8楼2016-07-22 00:29:27
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:27
没用过，你可以试一下，总感觉会损失很多，你还不如直接i冷冻干燥，然后重新溶解呢，或者以此为模板重新扩增啊，然后回收
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想做个有趣的人，却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-07-20 17:03:23
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:36
不建议过柱，会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。
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4楼2016-07-20 18:57:52
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2016-07-20 17:45:27
你是最后一步溶解DNA的时候溶解液加多了吗？我觉得你如果再次过柱子，得率应该也不高，因为离心的时候DNA会随溶解液一起被离到底部，这样吸附到柱子上的DNA会很少。建议可以用无水乙醇沉淀。
...

请问怎么用乙醇沉淀，加入乙醇后然后呢，具体步骤是什么？谢谢

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5楼2016-07-22 00:02:35
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-20 18:57:52
不建议过柱，会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。

请问怎么用乙醇沉淀，加入乙醇后然后呢，具体步骤是什么？谢谢

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6楼2016-07-22 00:03:08
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-20 18:57:52
不建议过柱，会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。

冷冻干燥需要冷冻干燥机对么？直接干燥到没有水分还是剩余点水分？能不能发一张冷冻干燥机图片，谢谢

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7楼2016-07-22 00:05:19
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pangadmire

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-22 00:29:27
1.加入两倍体积预冷无水乙醇，混匀后在-20度静置几小时，离心，弃上清，挥发干乙醇，重新用小体积水溶解。
2.真空冷冻干燥机。不同公司有很多，网上有很多，自己搜，不需要抽干，体积减小就行，你只是要提高浓度。

你好，用乙醇这种方法，有没有详细操作步骤？会不会损失DNA？十分感谢！

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9楼2016-07-22 00:45:26
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:49
引用回帖:
9楼: Originally posted by pangadmire at 2016-07-22 00:45:26
你好，用乙醇这种方法，有没有详细操作步骤？会不会损失DNA？十分感谢！
...

已经说得很清楚了，比如你有50uL样品要浓缩，加入100uL预冷无水乙醇，混匀，置于-20三小时，12000rpm离心10min，弃去上清，吸除残留液体，畅盖挥发干燥后，加20uL水溶解，这样浓度就了，操作注意点，一般损失会很少。知道了原理，步骤可以灵活掌握。
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10楼2016-07-22 00:52:18
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