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pangadmire

铁虫 (小有名气)

[求助] 利用胶回收试剂盒过滤柱增加DNA浓度 已有3人参与

回收DNA时,溶解液加多了,但是有很多管,计划用再次过柱子的方法,把几管浓缩成一管,用过这种方法的请发言。

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安静de执着14

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:13
你是最后一步溶解DNA的时候溶解液加多了吗?我觉得你如果再次过柱子,得率应该也不高,因为离心的时候DNA会随溶解液一起被离到底部,这样吸附到柱子上的DNA会很少。建议可以用无水乙醇沉淀。

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3楼2016-07-20 17:45:27
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:20
pangadmire: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-07-23 00:31:25
1.加入两倍体积预冷无水乙醇,混匀后在-20度静置几小时,离心,弃上清,挥发干乙醇,重新用小体积水溶解。
2.真空冷冻干燥机。不同公司有很多,网上有很多,自己搜,不需要抽干,体积减小就行,你只是要提高浓度。
8楼2016-07-22 00:29:27
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:27
没用过,你可以试一下,总感觉会损失很多,你还不如直接i冷冻干燥,然后重新溶解呢,或者以此为模板重新扩增啊,然后回收
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
2楼2016-07-20 17:03:23
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:36
不建议过柱,会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。
4楼2016-07-20 18:57:52
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pangadmire

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 安静de执着14 at 2016-07-20 17:45:27
你是最后一步溶解DNA的时候溶解液加多了吗?我觉得你如果再次过柱子,得率应该也不高,因为离心的时候DNA会随溶解液一起被离到底部,这样吸附到柱子上的DNA会很少。建议可以用无水乙醇沉淀。
...

请问怎么用乙醇沉淀,加入乙醇后然后呢,具体步骤是什么?谢谢

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5楼2016-07-22 00:02:35
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pangadmire

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-20 18:57:52
不建议过柱,会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。

请问怎么用乙醇沉淀,加入乙醇后然后呢,具体步骤是什么?谢谢

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6楼2016-07-22 00:03:08
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pangadmire

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-20 18:57:52
不建议过柱,会损失很多。用乙醇沉淀重新溶或者冷冻干燥。

冷冻干燥需要冷冻干燥机对么?直接干燥到没有水分还是剩余点水分?能不能发一张冷冻干燥机图片,谢谢

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7楼2016-07-22 00:05:19
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pangadmire

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by stone2239 at 2016-07-22 00:29:27
1.加入两倍体积预冷无水乙醇,混匀后在-20度静置几小时,离心,弃上清,挥发干乙醇,重新用小体积水溶解。
2.真空冷冻干燥机。不同公司有很多,网上有很多,自己搜,不需要抽干,体积减小就行,你只是要提高浓度。

你好,用乙醇这种方法,有没有详细操作步骤?会不会损失DNA?十分感谢!

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9楼2016-07-22 00:45:26
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-07-22 08:47:49
引用回帖:
9楼: Originally posted by pangadmire at 2016-07-22 00:45:26
你好,用乙醇这种方法,有没有详细操作步骤?会不会损失DNA?十分感谢!
...

已经说得很清楚了,比如你有50uL样品要浓缩,加入100uL预冷无水乙醇,混匀,置于-20三小时,12000rpm离心10min,弃去上清,吸除残留液体,畅盖挥发干燥后,加20uL水溶解,这样浓度就了,操作注意点,一般损失会很少。知道了原理,步骤可以灵活掌握。
10楼2016-07-22 00:52:18
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