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良辰1314521

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC 中药多组分含量测定 已有1人参与

1、本人从该中药分离得到14个黄酮化合物,应用HPLC对该中药进行多组分含量测定。
供试品制备:提取方式采用加热回流
比较了加热回流提取和超声提取两种提取方式,发现,加热回流提取峰数较多,且峰面积较多;考察了甲醇水和乙醇水两种提取溶剂,结果显示甲醇水峰数较多;甲醇水提取溶剂的用量,1g药材经15ml、25ml和50ml溶剂提取,结果显示50ml,峰面积适中;考察甲醇水比例25%、50%、75%和100%甲醇水,结果显示75%甲醇水,峰数较多,峰面积较大。因此,暂时确定以1g药材经50ml75%甲醇水加热回流2h,制得供试品,以此供试品考察色谱条件。
但,我分得的化合物在该药材的HPLC色谱图中只找到了4个化合物,结果如图所示。
请教大家,还有什么解决办法
2、 其中第二个大峰拖尾,请教还有什么解决办法
流动相添加剂考察了磷酸和甲酸,浓度分别为0.1%磷酸水和0.1%甲酸水。0.1%磷酸水分离效果较0.1甲酸水好,但拖尾严重,1号峰拖尾达到1.5左右;0.1%甲酸水峰形较好,但1号峰分离度差。

HPLC 中药多组分含量测定
IMG_20160719_215147.jpg
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品,天然产物分离纯化


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
良辰1314521: 金币+35, 有帮助, 3 2016-07-20 10:57:59
一般解决拖尾问题,除了调节PH还可以试试加入缓冲盐,还可以考察缓冲盐的浓度

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-07-20 07:56:18
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良辰1314521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 普思生物 at 2016-07-20 07:56:18
一般解决拖尾问题,除了调节PH还可以试试加入缓冲盐,还可以考察缓冲盐的浓度

嗯嗯,因为我的都是黄酮类化合物,所以,我在考虑假磷酸二氢钾、磷酸里加三乙胺,还有其他的吗,多多介绍几个,谢谢啦
3楼2016-07-20 10:59:40
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普思生物

专家顾问 (著名写手)

中药对照品,天然产物分离纯化


引用回帖:
3楼: Originally posted by 良辰1314521 at 2016-07-20 10:59:40
嗯嗯,因为我的都是黄酮类化合物,所以,我在考虑假磷酸二氢钾、磷酸里加三乙胺,还有其他的吗,多多介绍几个,谢谢啦...

用的比较多的就是,磷酸二氢钾,磷酸氢二钾,或者钠盐也可以,用磷酸调PH值,还有醋酸铵或者醋酸钠也比较常用,
4楼2016-07-20 12:23:35
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zyb45612

新虫 (小有名气)

只有四个化合物出来,可能是因为化合物极性的原因,导致75%甲醇提取不全或者量太少,如果想所有化合物都能找到,建议更换提取溶剂,比如丙酮,或者加大提取药材的量,总而言之,需要不断尝试,祝一切顺利。
5楼2016-07-21 10:48:38
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良辰1314521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zyb45612 at 2016-07-21 10:48:38
只有四个化合物出来,可能是因为化合物极性的原因,导致75%甲醇提取不全或者量太少,如果想所有化合物都能找到,建议更换提取溶剂,比如丙酮,或者加大提取药材的量,总而言之,需要不断尝试,祝一切顺利。

好的,谢谢。我现在有尝试乙腈水、正丁醇和95%乙醇水。希望多多提供宝贵建议
6楼2016-07-21 14:54:04
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lcx633123

银虫 (小有名气)

进样量超载也有可能导致拖尾甚至分裂峰。比如进样体积减半或者浓度减半,多尝试吧

发自小木虫Android客户端
思想有多暴烈,现实就有多收敛。
7楼2016-07-22 10:07:50
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良辰1314521

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lcx633123 at 2016-07-22 10:07:50
进样量超载也有可能导致拖尾甚至分裂峰。比如进样体积减半或者浓度减半,多尝试吧

嗯嗯,好的,谢谢
8楼2016-07-23 08:46:38
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